[发明专利]B细胞培养方法

权利要求书

1.用于培养一个或多个B细胞的方法，包括步骤

-将一个或多个B细胞与EL-4B5细胞共培养，

其中EL-4B5细胞已经在共培养之前用9.5Gy或更小的剂量照射过，并且

其中EL-4B5细胞的数目在共培养伊始小于5×10⁴/B细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中共培养额外地在饲养混合物存在下进行。

3.根据权利要求2所述的方法，其中饲养混合物包含以下一者或多者

i)白介素-1β和肿瘤坏死因子α，

ii)白介素-2和/或白介素-10，

iii)金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)菌株Cowan细胞，

iv)白介素-21和任选地白介素-2，

v)肿瘤坏死因子家族B细胞活化因子，

vi)白介素-6，

vii)白介素-4，和

viii)胸腺细胞培养上清液。

4.根据权利要求2至3中任一项所述的方法，其中饲养混合物包含2ng/ml鼠IL-1β，

2ng/ml鼠TNFα，

50ng/ml鼠IL-2，

10ng/ml鼠IL-10，和

10ng/ml鼠IL-6，

或其比例。

5.根据权利要求4所述的方法，其中饲养混合物的比例在IL-1β、TNFα、IL-2、IL-10和IL-6的所述浓度中每者的1.0-至0.015倍范围内。

6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其中饲养混合物还包含0.125ng/ml–1ng/ml佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中方法用于培养沉积的单一B细胞。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中共培养持续5至10天。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中将一个或多个B细胞与10,000至30,000个EL-4B5细胞共培养，所述EL-4B5细胞已经用剂量在3Gy至6Gy范围内的γ射线照射过。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中将一个或多个B细胞与10,000至30,000个EL-4B5细胞共培养，所述EL-4B5细胞已经用剂量在3Gy至6Gy范围内的γ射线照射过，其中饲养混合物包含0.06ng/ml IL-1β、0.06ng/ml TNFα、1.5ng/ml IL-2、0.3ng/ml IL-10、0.3ng/ml IL-6和0.25ng/ml–0.5ng/ml PMA。

11.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中将一个或多个B细胞与2,500至7,500个EL-4B5细胞共培养，所述EL-4B5细胞已经用剂量在0Gy至小于3Gy范围内的γ射线照射过。

12.根据权利要求1至8和11中任一项所述的方法，其中将一个或多个B细胞与2,500至7,500个EL-4B5细胞共培养，所述EL-4B5细胞已经用剂量在0Gy至小于3Gy范围内的γ射线照射过，其中饲养混合物包含0.06ng/ml至0.2ng/ml IL-1β、0.06ng/ml至0.2ng/ml TNFα、1.5ng/ml至5ng/ml IL-2、0.3ng/ml至1ng/ml IL-10、0.3ng/ml至1ng/ml IL-6和0.43ng/ml–0.73ng/ml PMA。