[发明专利]抑制靶干扰作用的抗药物抗体测定法

说明书

本文中报道了对血清或血浆样品中抗药物抗体的量定量的免疫测定法，所述抗药物抗体可以与药物抗体特异性结合，所述药物抗体可以与治疗靶特异性结合，包括步骤a)将血清或血浆样品在是约靶pI值的pH值温育，并且任选地移除温育后形成的沉淀物，b)将步骤a)中获得的血清或血浆样品在约2的pH值温育，并且任选地离心温育的样品以除去形成的沉淀物，c)调节pH值至约7.4，向步骤b)中获得的血清或血浆样品，添加与结合对子的第一成员缀合的捕获抗体和与可检测标记物缀合的示踪抗体，并且温育混合物以形成捕获抗体‑抗药物抗体‑示踪抗体‑复合物，d)对步骤c)中形成的复合物定量并且因而对血清或血浆样品中抗药物抗体的量定量。

本发明属于抗药物抗体测定法领域。本文中报道了一种来自治疗药物的靶的干扰作用降低的抗药物抗体测定法。

背景技术

Moxness,M.等人(Ann.N.Y.Acad.Sci.USA 1005(2003)265-268)报道了一种针对总Ig类胰岛素抗体(IAB)的放射配体结合测定法。首先酸化供试血清和对照血清以使结合型胰岛素解离，并且加入炭以吸附血清胰岛素。在中和后，通过离心从血清移除含有结合型胰岛素的炭。对于每种测定法，将取过胰岛素提的血清样品与放射标记的胰岛素在高水平未标记的胰岛素存在和不存在下温育，以分别确定非特异性结合和总结合。因此，Moxness等人报道了其中比较温育过夜和酸解离的两种ADA测定法方案的比较。

Patton,A.等人(J.Immunol.Meth.304(2005)189-195)报道了一种桥式ELISA，其使用与酸解组合的共价偶联的高密度抗原表面离步骤，以允许在人血清中的抗原存在下，即在不事先移除过量抗原的情况下，检测抗体。因此，Patton等人报道了一种在分析治疗用抗体前不移除过量抗原的分析方案。这些作者将酸预处理的样品与未预处理的样品比较，但测定程序相同。

Lee,J.W.等人(AAPS J.13(2011)99-110)报道，在支持药物开发中生物分析的主导驱动者是数据预期用途。测量循环中的mAb及其抗原配体(L)的可靠方法体系对支持有效性和安全性评价时评估暴露-反应关系和剂量选择至关重要。配体结合测定法(LBA)广泛用于分析蛋白质生物治疗药和抗原配体(L)以支持药代动力学/药效动力学(PK/PD)和安全性评估。对于尤其与L非共价结合的单克隆抗体药物(mAb)，多种形式的mAb和L可以在体内存在，包括游离mAb、游离L、和mAb和L的单价和/或双价复合物。鉴于给药后身体内出现的动态结合平衡的复杂性和生物分析期间的多个平衡扰动源，显而易见，对目的形式(游离、结合型或总mAb和L)的离体定量可能异于实际体内定量。LBA试剂和分析模式原则上可以设计成测量总或游离形式的mAb和L。但是，确认在指定条件下测量各形式可能在技术有挑战性。

Kelly,M.等人(AAPS J.,15(2013)646-658)报道，一个最近已经日益引起注意的领域是评估“游离”和“总”分析物及分析模式对这些评估的影响。作者们提供了可获得文献的批判性回顾并前瞻性探索了减轻抗药物抗体潜在影响PK分析量值的方法。另外，可以更动用于增加ADA(抗药物抗体)测定法中药物耐受性的方法以评估或增加PK测定法中的ADA耐受性，通常伴随一个破解免疫复合物及提取药物的制备性步骤。必须指出，实施这类有挑战性的操作将不是认定的后期临床生物分析惯例，但将在寻求其解释的药代动力学的方法开发的研究阶段尽早提供宝贵信息。最终，任何用来帮助定量药物的提取过程将多半产生“总体”评估。

Davis,R.A.等人(J.Pharm.Biomed.Anal.48(2008)897-901)报道了一种按捕获/酸洗脱样式使用单一非竞争性MoAb，在高水平治疗用MoAb存在下定量总(游离加结合型)生物标记物浓度。这种测定法有能力在200μ/ml或更多治疗用MoAb存在下准确检测并定量循环型ng/ml生物标记物水平。