[发明专利]双特异性抗原结合构建体

权利要求书

1.一种双特异性抗原结合构建体，其包含：

(a)结合第一靶抗原的单结构域抗体(VHH)结合区，其中所述单结构域抗体结合区与第一IgG Fc结构域多肽可操作地连接；和

(b)结合第二靶抗原的常规IgG抗体的Fab部分，其中所述Fab部分与第二IgG Fc结构域多肽可操作地连接；

其中所述第一IgG Fc结构域多肽和所述第二IgG Fc结构域多肽二聚化而形成所述双特异性抗原结合构建体。

2.根据权利要求1所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述VHH结合区和所述Fab部分是骆驼科动物来源的。

3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述第一IgG Fc结构域多肽和所述第二IgG Fc结构域多肽通过杵入臼相互作用、Fab臂交换(FAE)、静电转向相互作用或疏水性相互作用二聚化。

4.根据前述权利要求中任一项所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述第一IgG Fc结构域多肽包含杵状结构取代，并且所述第二IgG Fc结构域多肽包含臼状结构取代。

5.根据权利要求4所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述杵状结构取代选自由精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)组成的组。

6.根据权利要求4或5所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述臼状结构取代选自由丙氨酸(A)、天冬酰胺(N)、天冬氨酸(D)、甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和缬氨酸(V)组成的组。

7.根据前述权利要求中任一项所述的双特异性抗原结合构建体，其具有在约100kDa至约120kDa的范围的分子量。

8.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-7中任一项所述的双特异性抗原结合构建体。

9.一种核酸，其编码根据权利要求1-7中任一项所述的双特异性抗原结合构建体。

10.一种载体，其包含根据权利要求9所述的核酸。

11.一种宿主细胞，其包含根据权利要求10所述的载体。

12.一种制备双特异性抗原结合构建体的方法，其包括培养根据权利要求11所述的宿主细胞并且分离所述双特异性抗原结合构建体。

13.一种在患有疾病或病症的受试者中治疗所述疾病或病症的方法，其包括向所述受试者施用根据权利要求1-7中任一项所述的双特异性抗原结合构建体。

14.一种纯化根据权利要求1-7中任一项所述的双特异性抗原结合构建体的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供包含具有不同尺寸的抗原结合构建体的混合抗原结合构建体组合物；和

(b)基于尺寸分离所述混合抗原结合构建体组合物；

其中所期望的双特异性抗原结合构建体包含

(i)结合第一靶抗原的单结构域抗体(VHH)结合区，其中所述单结构域抗体结合区与第一IgG Fc结构域多肽可操作地连接；和

(ii)结合第二靶抗原的常规IgG抗体的Fab部分，其中所述Fab部分与第二IgG Fc结构域多肽可操作地连接；其中所述第一IgG Fc结构域多肽和所述第二IgG Fc结构域多肽二聚化而形成所述双特异性抗原结合构建体，

从而纯化所述双特异性抗原结合构建体。

15.根据权利要求14所述的方法，其中基于尺寸的分离包括尺寸排阻色谱法。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其中最初通过蛋白A、蛋白G、蛋白L或CH1选择性色谱法来纯化所述混合抗原结合构建体组合物。