[发明专利]根据可开发性选择真核细胞展示系统中的多肽药物

权利要求书

1.一种结合剂在体外培养的高等真核细胞上的表面呈现水平作为所述结合剂在溶液中的溶解度和/或其自缔合抗性的预测指标的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所培养的细胞是表达结合剂的多样化谱系的展示文库的克隆。

3.一种高等真核细胞的培养文库用于体外选择结合剂以实现在溶液中的较高溶解度和/或较低自缔合倾向的用途，

其中所述文库是各含有编码结合剂的DNA的高等真核细胞克隆的文库，其中已编码的所述结合剂呈现于细胞表面上。

4.一种结合剂发现方法，其中结合剂在展示文库的已培养高等真核细胞克隆表面上的表面呈现水平是用作所述结合剂在溶液中的溶解度和/或其自缔合抗性的预测指标。

5.一种根据结合剂在溶液中的溶解度和/或自缔合抗性将它们区分或排序和/或富集在溶液中展现较大溶解度和/或较大自缔合抗性的结合剂的方法，其包括

(i)提供各含有编码结合剂的DNA的高等真核细胞克隆的文库，

(ii)在用于表达所述结合剂的条件下体外培养所述克隆，其中所述结合剂呈现于细胞表面上，

(iii)测定所述结合剂在所述克隆上的表面呈现水平，任选地通过用并有可检测(例如荧光)标记的试剂标记所述结合剂来测定，

(iv)选出相较于其它克隆展现结合剂存在更高的表面呈现的一种或多种克隆，以及

(v)鉴定出由所述一种或多种所选克隆编码的在溶液中具有良好溶解度和/或自缔合抗性的结合剂，且任选地提供所选克隆用于一个或多个进一步筛选步骤。

6.根据权利要求1到3中任一项所述的用途，或根据权利要求4或权利要求5所述的方法，其中所述结合剂是含有跨膜域的多肽。

7.根据权利要求4或权利要求5所述的方法，包括通过用并有可检测(例如荧光)标记的试剂标记所述结合剂来测定所述结合剂在所述克隆上的表面呈现水平，其中所述试剂结合到所述结合剂的恒定区，任选地其中所述结合剂包括Fc区且所述试剂结合到所述Fc区。

8.根据权利要求4到7中任一项所述的方法，包括根据结合剂在细胞上的表面呈现水平将细胞分选到收集部分和丢弃部分中，其中将展示表面呈现大于预定阈值的细胞分选到所述收集部分中并且将展示表面呈现低于所述预定阈值的细胞分选到所述丢弃部分中。

9.根据权利要求8所述的方法，其中丢弃部分包括表达临界浓度为至少10mg/ml的比较多肽的细胞，且其中所述收集部分包括表达临界浓度为所述丢弃部分中的所述比较多肽的至少1.5倍高的结合剂的细胞。

10.根据权利要求8或权利要求9所述的方法，其中分选是利用荧光活化细胞分选仪(FACS)进行。

11.根据权利要求4到10中任一项所述的方法，其中步骤(ii)包括将所述文库中的所述克隆作为混合物在一个容器中培养。

12.根据权利要求4到10中任一项所述的方法，其中步骤(ii)包括在独立容器中培养所述文库中的每种克隆。

13.根据权利要求4到12中任一项所述的方法，其中所述结合剂是亲本结合剂的序列变异体。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述亲本结合剂已鉴定为需要改善其在溶液中的溶解度或自缔合抗性。