[发明专利]用于获得肌源性细胞的方法

权利要求书

1.用于获得骨骼肌源性细胞(SMDC)的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在缓冲液中冷却从骨骼肌组织获得的样品；

(b)加工并冷却所述样品；

(c)将步骤(b)的样品重悬于包含至少一种酶的具有血清的培养基中，并加热至38℃达1至20小时；将所述样品沉淀，和

(d)将步骤(c)的样品的沉淀物重悬以提供来自步骤(c)的样品的单细胞悬液，从而获得SMDC。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤(a)在低于16℃的温度下进行，优选在范围为1至16℃的温度下，优选4至10℃，特别优选在7℃下；并且在长达96小时的时间范围内进行。

3.根据权利要求1的方法，其中步骤(b)包括使用剪刀、手术刀、镊子、过滤器或球磨机。

4.根据权利要求1的方法，其中步骤(b)中的冷却在范围为1至16℃，优选4至8℃，特别优选4℃的温度下进行，并且在2小时至48小时的时间范围内进行。

5.根据权利要求1的方法，其中步骤(c)包括用包含选自下组的任何一种或多种的溶液进行酶处理：胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、弹性蛋白酶、透明质酸酶、胶原酶、脱氧核糖核酸酶和DNA酶。

6.根据权利要求1的方法，其中步骤(c)在范围为25至38℃的温度下进行，优选36至38℃，特别优选37℃。

7.根据权利要求1的方法，其中步骤(d)优选地包括选自以下的方法：FACS分选、离心、电动分选、声泳分选(acoustophoresis sorting)、基于珠的细胞分选和光学分选的至少一种。

8.根据权利要求1的方法，其中在步骤(d)之后进行进一步的任选步骤(e)，其包括温育在步骤(d)中获得的单细胞悬液，其中步骤(e)中的温育优选在范围为25至38℃的温度下进行，优选36至38℃，特别优选在37℃下进行，从而获得贴壁的SMDC。

9.根据权利要求1的方法，其中在步骤(e)之后任选地进行进一步的步骤(f)，其包括丢弃步骤(e)的非贴壁细胞，其中步骤(f)优选在至少6小时至4天之后进行。

10.根据权利要求1的方法，其中在步骤(f)之后任选地进行繁殖步骤(e)的贴壁细胞的进一步的步骤(g)，步骤(h)中的繁殖包括将贴壁细胞培养1至5代至70至80％汇合。

11.SMDC，其中所述SMDC包含至少60％CD56阳性和60％A2B5阳性细胞。

12.根据权利要求1至10中任一项的方法获得的SMDC。

13.根据权利要求11或12的SMDC，其中所述SMDC的特征在于表达选自以下的独特的标志物组合：选自CD56、A2B5、CD105、Myf5和Pax7的至少一种或多种标志物的阳性表达，和选自CD34和MyoD的至少一种或多种标志物的阴性表达。

14.根据权利要求11至13的SMDC，其用作药物组合物。

15.根据权利要求11至13的SMDC，其用于预防和/或治疗神经肌病和/或肌病的方法中，优选地，SMDC用于预防和/或治疗神经肌病和/或肌病如大便失禁和/或尿失禁的方法中。

16.根据权利要求11至13的SMDC，其用于治疗肌肉功能障碍的方法中，其中所述肌肉功能障碍是失禁，特别是尿失禁和/或肛门失禁或大便失禁。