[发明专利]用于恢复HBB基因功能的腺相关病毒组合物及其使用方法

权利要求书

1.一种用于校正细胞中β珠蛋白(HBB)基因中的突变的方法，所述方法包括用复制缺陷型腺相关病毒(AAV)转导所述细胞，所述复制缺陷型腺相关病毒(AAV)包含：

a)AAV衣壳，其包含AAV进化枝F衣壳蛋白；以及

b)校正基因组，所述校正基因组包括：(i)用于编辑靶基因中的靶基因座的编辑元件；(ii)所述编辑元件的5'的5'同源臂核苷酸序列，其与所述靶基因座的5'的第一基因组区具有同源性；以及(iii)所述编辑元件的3'的3'同源臂核苷酸序列，其与所述靶基因座的3'的第二基因组区具有同源性，

其中转导细胞，而不共转导或共给予外源性核酸酶或编码外源性核酸酶的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞为多能干细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞为造血干细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞为CD34⁺造血干细胞。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述细胞在哺乳动物受试者中，并且将所述AAV以有效转导所述受试者中的细胞的量给予所述受试者。

6.一种用于治疗患有与HBB基因突变相关的疾病或病症的受试者的方法，所述方法包括：

a)用复制缺陷型AAV转导来自所述受试者的先体外后体内红细胞祖细胞，所述复制缺陷型AAV包含：

(i)AAV衣壳，其包含AAV进化枝F衣壳蛋白；以及

(ii)校正基因组，所述校正基因组包括：(A)编辑元件，用于编辑靶基因中的靶基因座；(B)所述编辑元件的5'的5'同源臂核苷酸序列，其与所述靶基因座的5'的第一基因组区具有同源性；以及(C)所述编辑元件的3'的3'同源臂核苷酸序列，其与所述靶基因座的3'的第二基因组区具有同源性，从而得到具有校正的HBB基因的转导细胞；以及

b)将所述转导细胞给予所述受试者，

其中转导所述细胞，而不共转导外源性核酸酶或编码外源性核酸酶的核苷酸序列。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述红细胞祖细胞为多能干细胞。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述红细胞祖细胞为造血干细胞。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述红细胞祖细胞为CD34⁺造血干细胞。

10.一种治疗患有与HBB基因突变相关的疾病或病症的受试者的方法，所述方法包括给予所述受试者有效量的复制缺陷型AAV，所述复制缺陷型AAV包含：

a)AAV衣壳，其包含AAV进化枝F衣壳蛋白；以及

b)校正基因组，所述校正基因组包括：(i)编辑元件，用于编辑靶基因中的靶基因座；(ii)所述编辑元件的5'的5'同源臂核苷酸序列，其与所述靶基因座的5'的第一基因组区具有同源性；以及(iii)所述编辑元件的3'的3'同源臂核苷酸序列，其与所述靶基因座的3'的第二基因组区具有同源性，

而不共给予外源性核酸酶或编码外源性核酸酶的核苷酸序列。

11.根据权利要求6-10中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症为地中海贫血或镰状细胞病。

12.根据权利要求6-10中任一项所述的方法，其中所述受试者为人受试者。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述靶基因为HBB基因。

14.根据前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其中所述靶基因座在HBB基因中的核苷酸点突变、插入或缺失处。