[发明专利]在固定于用于侧流测定的条上捕集区中的无标记光学检测

说明书

一种包含多孔基质的测试条，该测试条包含：样品施加区，其用于施加包含分析物的液体样品；报告物释放区，其包含传感材料，该传感材料适于通过释放光学报告物来与该分析物选择性相互作用，该报告物释放区布置在该样品施加区的下游；和检测区，其包含适于选择性结合该光学报告物的捕集材料并且布置在该报告物释放区的下游。

领域和背景

本发明涉及用于快速且灵敏地检测分析物的方法，例如在医学诊断和环境监测中、在安保领域、职业健康和安全中以及在食品相关领域中。在分析物是某些核酸的情况下，它的检测在法医或在微生物学相关问题如细菌或其他微生物污染方面也是至关重要的。特别地，本发明涉及侧流测定形式。

在所有用于快速测试的方法中，侧流测定是最常用的，并且在市场上可以获得成百种基于该技术的测试套件。这种类型的测定通常包含往往是硝基纤维素或玻璃的纤维膜条，在其中样品-指示剂络合物可以通过条的多孔结构内液体的毛细管力来传输。该膜条通常包含样品施加区和检测区，在检测区中固定有针对分析物的捕集试剂(往往是抗体或抗体片段)。最后，在条端部处的吸收垫通常确保液体的连续毛细管流动。

然而，已知的侧流测定的一个主要缺点在于大部分捕集剂或是仅通过与标记的类似物竞争来间接指示分析物，或是依照传统的指示剂方案，即不得不同时实现选择性和灵敏地结合以及产生强信号。这往往是难以实现的，并且在大多数情况下，相当大地降低了灵敏度。已知的侧流测定的另一缺点在于每个测定仅可以测量几个分析物。此外，在大部分情况下，需要能够直接或间接结合到分析物上的第二结合剂，例如第二标记的抗体或抗体片段。

已知的方法主要基于传统的指示剂方案，在其中分析物和指示剂或免疫剂之间的相互作用必须依照规定的化学计量，并且结合和指示事件是固有耦合的。在许多情况下，检测仅是在使用第二结合剂之后完成，这不仅增加了成本，而且潜在引入了更多的误差。

简要概述

针对该背景，根据第一实施方案，提出了一种包含多孔基质的测试条。该测试条包含：

-样品施加区，其用于施加包含分析物的液体样品，其中该分析物典型地溶解或增溶在液体中；

-报告物释放区，其包含传感材料，该传感材料适于通过释放响应于该分析物存在的光学报告物来与该分析物选择性地相互作用，该报告物释放区布置在该样品施加区的下游；

-检测区，其包含适于选择性结合该光学报告物的捕集材料，并且布置在该报告物释放区的下游。

换言之，如果含有分析物的液体润湿了传感材料，则报告物从测试条上的传感材料中释放。由于测试条包含多孔基质，因此由毛细管力驱动的液体(例如溶剂)可以在多孔基质内流动并且随后润湿全部区。所释放的报告物通过液体流、典型地通过溶剂流(流)传输到检测区。相对于该液体流或流，报告物释放区位于与样品施加区相比的下游。此外，检测区相对于该液体流或流来说位于与报告物释放区相比的下游。关于不同区的顺序，以或在流动液体的连续或不连续流方向上，样品施加区是第一，报告物释放区是第二，和检测区是第三。报告物在至少一个检测区中的存在和/或量典型地通过检测手段来量化。然而，分析物的存在和表观量偶尔也可以在无需任何另外仪器的情形下通过使用检测区的合适的照明仅目视检查来评价。

根据另一实施方案，提出了一种检测分析物的方法。该方法包括：

-提供包含多孔基质的测试条，该测试条包含：至少一个样品施加区；报告物释放区，其包含传感材料，其中该传感材料适于在与该分析物接触之后，通过释放报告物来与该分析物选择性相互作用；和检测区，其包含捕集材料，其中该捕集材料适于选择性结合该报告物；

-将样品施加到该样品施加区；

-在至少一个检测区中检测该报告物的存在和/或量和/或浓度；

-确定样品中该分析物的存在和/或浓度。