[发明专利]用聚醚离子载体调整蛋白质甘露糖基化状况的方法

说明书

本发明涉及用聚醚离子载体在细胞培养过程中调整哺乳动物宿主细胞所表达重组蛋白甘露糖基化状况的方法和组合物。

发明领域

本发明涉及用聚醚离子载体在细胞培养过程中调整哺乳动物宿主细胞所表达重组蛋白甘露糖基化状况的方法和组合物。

背景技术

蛋白质如治疗性蛋白质或抗体的糖基化状况是重要的特征，由于其对例如折叠、稳定性和抗体依赖性细胞毒性(ADCC，负责抗体治疗效果的机制之一)的影响而导致半衰期和亲和力变化，进而影响蛋白质的生物学活性(Eon-Duval等，2012)。糖基化高度依赖于用来生产感兴趣蛋白质的细胞系以及细胞培养过程(pH、温度、细胞培养基组成、原料批次间区别、培养基过滤材料、空气等)。

ADCC活性受与Fc区的寡糖连接的岩藻糖和/或甘露糖的量影响，可观察到随着岩藻糖减少和/或甘露糖增加而活性增强。事实上，举例来说，与岩藻糖基化的IgG相比，非岩藻糖基化形式表现出显著增强的ADCC，因为后者FcγRIIIa结合容量(binding capacity)增加而补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗原结合能力都未见改变(Yamane-Ohnuki和Satoh,2009)。类似地，甘露糖-5聚糖水平高的抗体ADCC也更高(Yu等，2012)。因此，在ADCC反应为抗体活性主要治疗机制的情况下，提供方法来制备糖基化状况以岩藻糖基化降低和/或甘露糖基化升高为特征的重组治疗性蛋白质是有益的。高甘露糖基化抗体的优点还包括在低剂量下达到治疗效果。

由于糖基化(例如甘露糖基化)会影响治疗效用和安全性，因此蛋白质糖基化(例如甘露糖基化)的调整对于市售治疗性蛋白质或抗体尤其重要。此外，在生物仿制药化合物框架内，重组蛋白糖基化状况的控制是至关重要的，因为所述重组蛋白的糖基化状况必须与参照产物的糖基化状况一致。已知有些化合物能影响重组产生的蛋白质的甘露糖基化：例如WO2014151878和WO2014159259记载用蔗糖之类寡糖提高甘露糖基化水平，WO2015105609采用精氨酸酶抑制剂，WO2015066357提出采用莫能菌素(monensine)。

然而，仍然需要允许控制重组蛋白糖基化状况例如甘露糖基化状况但不影响在培细胞的性能和重组蛋白产量的培养条件和生产方法。本发明通过提供用于调整重组蛋白糖基化例如重组蛋白甘露糖基化同时保持产量/条件亦可接受的方法和组合物来满足该需求。

发明内容

在一个方面，本发明提供一种产生甘露糖基化状况经调整的重组蛋白的方法，所述方法包括在含有聚醚离子载体的细胞培养基中培养表达所述蛋白的宿主细胞。

或者，本文公开了一种产生甘露糖基化状况经调整的重组蛋白的方法，所述方法包括在补充以至少一种包含聚醚离子载体的补料的细胞培养基中培养表达所述蛋白的宿主细胞。

另一方面，本发明提供一种包含细胞培养基的组合物，所述细胞培养基含有聚醚离子载体或补充以聚醚离子载体。

另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含本发明方法产生的甘露糖基化状况经调整的重组蛋白和药学上可接受的运载体。

另一方面，本发明提供一种组合物，其包含本发明方法产生的甘露糖基化状况经调整的重组蛋白。

再一方面，本发明提供聚醚离子载体在细胞培养基中或在补料培养基中用于调整重组蛋白甘露糖基化状况的用途。

优选地，聚醚离子载体选自马杜拉霉素(maduramycin)、甲基盐霉素(narasin)或盐霉素(salinomycin)。

附图说明

注：全部附图中：S0后跟浓度＝培养开始时的盐霉素浓度，N0后跟浓度＝培养开始时的甲基盐霉素浓度，M0后跟浓度＝培养开始时的马杜拉霉素浓度，M5后跟浓度＝第5天作为补料添加的马杜拉霉素的浓度，M7后跟浓度＝第7天作为补料添加的马杜拉霉素的浓度。uM＝微摩尔。mioVC/mL＝每mL百万活细胞。