[发明专利]用于抑制LDHA表达的方法和组合物

说明书

本公开内容涉及可用于降低LDHA表达、特别是肝细胞中的LDHA表达的寡核苷酸、组合物和方法。

相关申请

本申请根据35 U.S.C. § 119（e）要求以下的权益：于2018年9月4日提交的名称为“METHODS AND COMPOSITIONS FOR INHIBITING EXPRESSION OF LDHA”的美国临时申请号62/726950、于2017年10月13日提交的名称为“METHODS AND COMPOSITIONS FORINHIBITING EXPRESSION OF LDHA”的美国临时申请号62/572403、以及于2017年10月13日提交的名称为“METHODS AND COMPOSITIONS FOR INHIBITING EXPRESSION OF LDHA”的美国临时申请号62/572398，所述美国临时申请的全部内容引入本文作为参考。

发明领域

本发明涉及用于降低基因表达和/或活性的寡核苷酸、组合物和方法。

发明背景

原发性高草酸尿症（PH）是由草酸盐的过量生产引起的常染色体隐性遗传病症，导致肾中的草酸钙沉淀，并且最终导致晚期肾病。存在称为PH 1型（PH1）、2型（PH2）和3型（PH3）的3种形式的PH，以及特发性高草酸尿症。乳酸脱氢酶（LDH）已被鉴定为用于降低肝脏草酸盐生产的靶，因为它是负责将乙醛酸盐转换为草酸盐(肝脏中的草酸盐代谢的最后一步)的关键酶。已开发了靶向编码LDH亚基的基因的RNAi寡核苷酸。

发明概述

本发明至少部分基于有效寡核苷酸的鉴定，所述有效寡核苷酸产生持久的基于RNAi的LDH蛋白敲减，从而降低LDH酶活性。在一些实施方案中，与现有的寡核苷酸相比，本文公开的RNAi寡核苷酸除其它特征外还具有改善的稳定性、改善的生物利用度、改善的肝靶向和/或改善的对基因敲减的持续作用。在一些实施方案中，本文公开的RNAi寡核苷酸包含N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）部分与之缀合的具有缺口的四环结构，用于将寡核苷酸特异性地递送至肝细胞，从而避免或最小化在其它组织例如肌肉、皮肤或子宫中的潜在的不希望有的效应。在一些实施方案中，本文公开的RNAi寡核苷酸可用于降低受试者（例如患有原发性高草酸尿症的患者）中的肝草酸盐产生。在一些实施方案中，本文公开的RNAi寡核苷酸可用于降低尿草酸盐水平。在一些实施方案中，本文公开的RNAi寡核苷酸可用于治疗原发性高草酸尿症，包括PH1、PH2和/或PH3，以及特发性高草酸尿症。

本公开内容的一些方面提供了用于降低LDHA表达的寡核苷酸，该寡核苷酸包含具有如UCAGAUAAAAAGGACAACAUGG（SEQ ID NO：1）所示的序列的反义链、以及具有如AUGUUGUCCUUUUUAUCUGAGCAGCCGAAAGGCUGC（SEQ ID NO：2）所示的序列的有义链。

在一些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸的所有核苷酸都是修饰的。在一些实施方案中，修饰的核苷酸包含2'-修饰。在一些实施方案中，2'-修饰是2'-氟或2'-O-甲基。在一些实施方案中，下述位置中的一个或多个用2'-O-甲基进行修饰：有义链的位置1、2、4、6、7、12、14、16、18-26或31-36和/或反义链的位置1、6、8、11-13、15、17或19-22。在一些实施方案中，有义链的位置1、2、4、6、7、12、14、16、18-26和31-36，以及反义链的位置1、6、8、11-13、15、17和19-22都用2'-O-甲基进行修饰。在一些实施方案中，下述位置中的一个或多个用2'-氟进行修饰：有义链的位置3、5、8-11、13、15或17和/或反义链的位置2-5、7、9、10、14、16或18。在一些实施方案中，有义链的位置3、5、8-11、13、15或17，以及反义链的位置2-5、7、9、10、14、16和18都用2'-氟进行修饰。