[发明专利]CAS9变体和使用方法

权利要求书

1.一种Cas9内切核酸酶变体或其活性片段，所述Cas9内切核酸酶变体或其活性片段与SEQ ID NO:1中所示的亲本Cas9多肽具有至少80％的氨基酸同一性，并且在选自由位置86、位置98、位置155及其组合组成的组的位置处具有至少一个氨基酸取代，其中所述变体的氨基酸位置通过与所述亲本Cas9多肽的氨基酸序列相对应来编号，其中所述Cas9内切核酸酶变体具有内切核酸酶活性。

2.如权利要求1所述的Cas9内切核酸酶变体，其中所述至少一个氨基酸取代选自由以下组成的组：Y155H、Y155N、Y155E、Y155F(在位置155处)、F86A(在位置86处)和F98A(在位置98处)。

3.如权利要求1所述的Cas9内切核酸酶变体，其中所述Cas9内切核酸酶变体当与所述亲本Cas9内切核酸酶相比时具有选自由以下组成的组中的至少一种改善的特性：改善的转化效率和改善的编辑效率。

4.如任一前述权利要求所述的Cas9内切核酸酶变体或其活性片段，其中所述变体包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

5.如权利要求3所述的Cas9内切核酸酶变体，其中所述改善的特性是改善的转化效率，并且其中所述变体或其活性片段还具有改善的编辑效率。

6.如任一前述权利要求所述的Cas9内切核酸酶变体或其活性片段，所述Cas9内切核酸酶变体或其活性片段当与所述亲本Cas9内切核酸酶相比时包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸取代。

7.一种组合物，所述组合物包含如前述权利要求中任一项所述的Cas9内切核酸酶或其功能片段。

8.如权利要求7所述的组合物，其中所述组合物选自由以下组成的组：指导多核苷酸/Cas9内切核酸酶复合物、指导RNA/Cas9内切核酸酶复合物和包含所述Cas9内切核酸酶变体的融合蛋白。

9.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码如前述权利要求中任一项所述的Cas9内切核酸酶变体的核酸序列。

10.一种指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物(PGEN)，所述指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物包含至少一种指导多核苷酸和至少一种如权利要求1-6中任一项所述的Cas9内切核酸酶变体，其中所述指导多核苷酸是嵌合的非天然存在的指导多核苷酸，其中所述指导多核苷酸/Cas内切核酸酶复合物能够识别、结合靶序列的全部或部分并任选地使靶序列的全部或部分产生切口、解旋或切割靶序列的全部或部分。

11.一种重组DNA构建体，所述重组DNA构建体包含如权利要求9所述的多核苷酸。

12.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求1-6中任一项所述的Cas9内切核酸酶或其功能片段。

13.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求9所述的多核苷酸。

14.如权利要求13所述的宿主细胞，其中所述细胞是原核细胞或真核细胞。

15.如权利要求14所述的宿主细胞，其中所述细胞选自由以下组成的组：人类、非人类、动物、细菌、真菌、昆虫、酵母、非常规酵母和植物细胞。