[发明专利]用于检测靶蛋白的非抗体配体

说明书

本发明总体上涉及在包含靶杀昆虫蛋白和非靶杀昆虫蛋白的复合生物基质中示差检测或定量所述靶蛋白的合成非抗体蛋白支架(synNAPS)，并且涉及在免疫测定中使用synNAPS的方法，并且更具体地涉及用于在复合生物样品中示差检测和定量来自苏云金芽孢杆菌的野生型晶体蛋白如野生型Cry1Ab、和杂合晶体蛋白的单克隆抗体和免疫测定，所述杂合晶体蛋白包含全部或很大一部分野生型Cry蛋白，所述复合生物样品包含野生型Cry蛋白和一种或多种杂合Cry蛋白两者。

技术领域

本发明涉及特异性结合杀昆虫蛋白并且可用于复合混合物中目的靶蛋白的示差检测或定量的合成非抗体蛋白支架。本发明进一步总体上涉及用于在生物样品(例如含有靶蛋白和非靶蛋白的复合混合物的转基因植物样品)中可靠地确定某些目的靶蛋白的存在和量的诊断方法，并且涉及为所述诊断方法提供基本试剂的测试试剂盒。

背景技术

转基因作物由越来越复杂的遗传修饰(包括赋予不同性状的多个转基因，也称为“基因堆叠”或“性状堆叠”)组成。例如，目前市场上的许多转基因玉米产品在同一植物内含有用于控制广谱昆虫有害生物的多种杀昆虫蛋白和赋予植物对广谱化学除草剂的耐受性的多种蛋白。许多用于控制昆虫有害生物的转基因蛋白(例如来自苏云金芽孢杆菌的晶体内毒素(称为Cry蛋白))可以彼此结构上密切相关并且具有相似的总体氨基酸序列同一性或含有具有显著同一性的基序或结构域。一般而言，Cry蛋白例如具有三个结构性结构域：N-末端结构域I，从残基1至约290，由7个α螺旋组成；结构域II，从约残基291-500，含有三个β片层；以及C-末端结构域III，从约残基501-644，为β夹层(beta-sandwich)。大多数针对鳞翅目或鞘翅目昆虫有活性的Cry蛋白在结晶基体中分别形成为130-140kDa或60-70kDa的原毒素。在鳞翅目昆虫中，肠的碱性pH溶解这种晶体并且然后肠蛋白酶将130-140kDa的原毒素加工成大约60-70kDa的毒蛋白。在鞘翅目昆虫中，60-70kDa的原毒素被加工成55-67kDa的毒素。鳞翅目活性Cry蛋白的实例包括Cry1A、Cry1B、Cry1C、Cry1D、Cry1E、Cry1F和Cry9。鞘翅目活性Cry蛋白的实例包括Cry3A、Cry3B、Cry3C、Cry8、二元Cry23-Cry37以及二元Cry34-Cry35。已报道将Cry蛋白原毒素蛋白水解加工成杀昆虫毒素是通过去除N-末端和C-末端的氨基酸而进行的，其中进行加工的确切部位取决于特异性Cry蛋白以及所涉及的特异性昆虫肠液(Ogiwara等人,1992,J.Invert.Pathol.[无脊椎动物病理学杂志]60:121-126)。Gry原毒素的这种蛋白水解激活在确定其特异性方面能够发挥重要作用。