[发明专利]具有两个表达盒的猿猴腺病毒载体

说明书

猿猴腺病毒载体，其包含两个表达盒，其中每个表达盒都包含转基因和启动子，且其中第一表达盒被插入所述猿猴腺病毒载体的E1区域中，且第二表达盒被插入所述腺病毒载体的与载体复制相容的区域中。

序列表

本申请含有已经以ASCII形式电子提交且在此以其整体通过引用并入的序列表。所述ASCII拷贝，在2018年10月11日创建，命名为VU66441A_WO_SL.txt，且大小为178,926字节。

发明领域

本发明处于重组腺病毒载体的领域中。本发明涉及包含两个表达盒的腺病毒载体。具体而言，本发明涉及猿猴腺病毒，诸如黑猩猩(chimp)腺病毒，其包含两个表达盒。

发明背景

重组腺病毒可用于基因疗法中且可用作疫苗。

由于它们的大转基因容量和在各种靶标组织中实现高度有效基因转移的能力，人腺病毒已被广泛用于基因转移应用。

然而，大多数人暴露于人腺病毒并发展对人腺病毒的免疫力。因此，需要有效地将分子递送至靶标并使预先存在的对人腺病毒血清型的免疫力的影响最小化的载体。猿猴腺病毒在这方面是有效的；它们与人病毒足够密切相关，以有效地诱导对递送的外源性抗原的免疫力，人对所述递送的外源性抗原几乎没有预先存在的免疫力或没有预先存在的免疫力。因此，基于猿猴腺病毒的病毒载体可以提供人来源的腺病毒载体用于开发基于核酸的疫苗的用途的替代方案。

复制缺陷的腺病毒将其基因组递送至细胞的内部，并且因为它们不复制，所以不扩增转基因有效载荷。通常，E1基因被包含选择的启动子和对应于一个或多个目标基因的核酸序列的转基因盒替换，产生复制缺陷的重组病毒。

在本领域中需要改进的重组腺病毒。

发明概述

本发明涉及猿猴腺病毒载体，其包含两个表达盒。具体而言，本发明涉及猿猴腺病毒，诸如黑猩猩(chimp)腺病毒，其包含两个表达盒。合适的黑猩猩腺病毒的实例包括ChAd155和ChAd83。

本发明的腺病毒载体可用作免疫原性组合物的组分，其用于诱导受试者中的免疫应答，其在治疗中的使用方法和制造方法。

术语“载体”是指含有或携带遗传物质且可以用于将外源基因引入生物体的试剂(诸如质粒或病毒)。本发明的腺病毒载体源自非人猿猴腺病毒，也称为“猿猴腺病毒”。优选地，本发明的猿猴腺病毒载体是猿猴腺病毒。

本发明的腺病毒载体中的每个表达盒包含转基因和启动子。“转基因”是编码目标多肽的核酸序列，其与侧接所述转基因的载体序列异源。核酸编码序列以允许宿主细胞中的转基因转录、翻译和/或表达的方式可操作连接至调节组分。“启动子”是允许RNA聚合酶的结合并指导基因的转录的核苷酸序列。通常，启动子位于靠近转录起始位点的基因的非编码区域中。

在本发明的腺病毒载体中，所述第一表达盒被插入病毒的E1区域中，且所述第二表达盒被插入腺病毒载体的第二区域中。

在本发明的包含两个表达盒的猿猴腺病毒载体中，所述第一表达盒被插入猿猴腺病毒载体的E1区域中，且所述第二表达盒被插入腺病毒载体的与载体复制相容的区域中。如果腺病毒载体基因组的区域的破坏不会影响腺病毒载体复制的能力，则认为该区域“与载体复制相容”。

优选地，在本发明的腺病毒载体中，所述第一表达盒被插入病毒的E1区域中，且所述第二表达盒被插入腺病毒载体的E3、HE1或HE2区域中。如本领域中众所周知的，E3基因在转导的早期表达，以准备宿主细胞用于病毒复制。E3参与免疫调节。术语“HE1”用于描述位于L5和E4的终止密码子之间的位点。术语“HE2”已用于定义位于ITR的末端和E4 mRNA的帽位点之间的位点。

例如，在ChAd155腺病毒载体中：