[发明专利]一种获得单细胞mRNA序列的方法

权利要求书

1.一种获得单细胞mRNA序列的方法，包括如下步骤：

（1）利用细胞标签载体捕获细胞的mRNA，然后进行反转录，得到具有细胞标签的cDNA；所述细胞标签载体为携带细胞标签的固相载体；来自于同一个细胞的cDNA具有相同的细胞标签，来自于不同细胞的cDNA具有不同的细胞标签；

（2）利用转座酶复合体和分子标签载体，得到具有分子标签的多个cDNA片段；来自于同一cDNA的各个片段具有相同的分子标签，来自于不同cDNA的片段具有不同的分子标签；分子标签载体为携带分子标签的固相载体；

（3）高通量测序；

（4）测序结果根据分子标签进行序列拼接，得到每个mRNA的序列；进一步根据细胞标签，得到每个单细胞的所有mRNA的序列；

其中，所述细胞标签载体是将多条DNA分子乙连接至固相载体表面得到的；DNA 分子乙为部分双链结构，由两条部分互补的单链 DNA 分子组成，所述DNA 分子乙中具有细胞标签和mRNA捕获区；

所述分子标签载体是将多条DNA分子甲连接至固相载体表面得到的；DNA 分子甲为部分双链结构，由两条部分互补的单链DNA分子组成，所述DNA分子甲中具有分子标签和转酶复合体捕获区。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

在步骤（1）和步骤（2）之间包括富集目标物的步骤；

和/或

在步骤（2）和步骤（3）之间包括富集目标物的步骤。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：

步骤（1）和步骤（2）之间的富集目标物的步骤，为PCR扩增或滚环扩增。

4.一种获得单细胞mRNA序列并定量的方法，包括如下步骤：

（1）利用细胞标签载体捕获细胞的mRNA，然后进行反转录，得到具有细胞标签和转录本标签的cDNA；所述细胞标签载体为携带细胞标签和转录本标签的固相载体；来自于同一细胞的cDNA具有相同的细胞标签，来自于不同细胞的cDNA具有不同的细胞标签；来自于同一细胞的各个cDNA具有不同的转录本标签；

（2）利用转座酶复合体和分子标签载体，得到具有分子标签的多个cDNA片段；来自于同一cDNA的各个片段具有相同的分子标签，来自于不同cDNA的片段具有不同的分子标签；分子标签载体为携带分子标签的固相载体；

（3）高通量测序；

（4）测序结果根据分子标签进行序列拼接，得到每个mRNA序列；进一步根据细胞标签，得到每个单细胞的所有mRNA的序列；最后根据mRNA序列相同但转录本标签不同的序列数量，对每个单细胞的mRNA进行定量；

其中，所述细胞标签载体是将多条DNA分子乙连接至固相载体表面得到的；DNA分子乙为部分双链结构，由两条部分互补的单链DNA分子组成；所述DNA分子乙中具有细胞标签、转录本标签和mRNA捕获区；

所述分子标签载体是将多条DNA分子甲连接至固相载体表面得到的；DNA分子甲为部分双链结构，由两条部分互补的单链DNA分子组成；所述DNA分子甲中具有分子标签和转座酶复合体捕获区。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：

在步骤（1）和步骤（2）之间包括富集目标物的步骤；

和/或

在步骤（2）和步骤（3）之间包括富集目标物的步骤。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：

步骤（1）和步骤（2）之间的富集目标物的步骤，为PCR扩增或滚环扩增。