[发明专利]使用天冬酰胺酶的治疗方法

说明书

本发明涉及用L‑天冬酰胺酶治疗疾病的方法。

技术领域

本发明涉及一种具有显著的L-天冬酰胺氨基水解酶活性的蛋白质和聚乙二醇的缀合物，特别地，其中聚乙二醇具有小于或等于约5000Da的分子量，特别地涉及其中蛋白质是来自欧文氏菌的L-天冬酰胺酶的缀合物，以及其在疗法中的用途。

背景技术

具有L-天冬酰胺氨基水解酶活性的蛋白质，通常称为L-天冬酰胺酶，多年来已成功用于治疗儿童的急性成淋巴细胞性白血病(ALL)。ALL是最常见的儿童恶性肿瘤(Avramis和Panosyan,(2005)44:367-393)。

L-天冬酰胺酶还已用于治疗霍奇金病、急性粒细胞性白血病、急性粒-单核细胞白血病(acute myclomonocytic Leukemia)、慢性淋巴细胞性白血病、淋巴肉瘤、网状细胞肉瘤和黑素肉瘤(Kotzia(2007)J.Biotechnol.127,657-669)。据信，L-天冬酰胺酶的抗肿瘤活性是由于某些恶性细胞不能合成L-天冬酰胺或合成能力降低(Kotzia(2007)J.Biotechnol.127,657-669)。这些恶性细胞依赖于L-天冬酰胺的细胞外供应。然而，L-天冬酰胺酶催化L-天冬酰胺水解为天冬氨酸和氨，从而耗尽L-天冬酰胺的循环池并杀死在没有L-天冬酰胺的情况下不可进行蛋白质合成的肿瘤细胞(Kotzia(2007)J.Biotechnol.127,657-669)。

来自大肠杆菌(E.coli)的L-天冬酰胺酶是ALL疗法中使用的第一酶药物，并且已经作为在美国或作为和L-天冬酰胺酶在欧洲上市。还已经从其他微生物中分离出L-天冬酰胺酶，例如，来自菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi)的L-天冬酰胺酶蛋白，被称为克立他酶(crisantaspase)，其已经作为上市(Wriston(1985)Meth.Enzymol.113,608-618；Goward(1992)Bioseparation 2,335-341)。还鉴定了来自欧文氏菌的其他菌种的L-天冬酰胺酶，包括，例如，菊欧文氏菌3937(Genbank登录号AAS67028)、菊欧文氏菌NCPPB 1125(Genbank登录号CAA31239)、胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)(Genbank登录号AAP92666)和胡萝卜软腐欧文氏菌马铃薯黑胫亚种(Erwinia carotovora subsp.astroseptica)(Genbank登录号AAS67027)。这些菊欧文氏菌L-天冬酰胺酶彼此间具有约91-98％的氨基酸序列同一性，而胡萝卜软腐欧文氏菌L-天冬酰胺酶与菊欧文氏菌L-天冬酰胺酶具有大约75-77％的氨基酸序列同一性(Kotzia(2007)J.Biotechnol.127 657-669)。

目前可得的L-天冬酰胺酶制剂不提供替代或互补疗法，特别是治疗ALL的疗法，其特征在于高的催化活性和显著改善的药理学和药代动力学特性，以及降低的免疫原性。

在一个方面，本发明要解决的问题是提供一种L-天冬酰胺酶制剂，其具有：高的体外生物活性；稳定的PEG-蛋白质连接；延长的体内半衰期；显著降低的免疫原性，如例如重复施用后针对L-天冬酰胺酶制剂的抗体应答的减少或消除所证明的；以及对于对使用例如大肠杆菌来源的L-天冬酰胺酶的一线疗法产生了敏感性的患者，作为二线疗法的可用性。

已知的L-天冬酰胺酶缀合物尚未解决这一问题，其具有与修饰的L-天冬酰胺酶制剂的显著交叉反应性(Wang(2003)Leukemia 17,1583-1588，以引用方式整体并入本文)，或具有明显降低的体外活性(Kuchumova(2007)Biochemistry(Moscow)增刊B:BiomedicalChemistry,1,230-232，以引用方式整体并入本文)。根据本发明，通过提供欧文氏菌L-天冬酰胺酶与亲水性聚合物(更具体地，具有5000Da或更少的分子量的聚乙二醇)的缀合物、用于制备这种缀合物的方法以及所述缀合物的用途而解决了这一问题。

发明内容