[发明专利]用于鉴别病毒性感染与细菌性感染的方法和设备

说明书

本发明涉及一种用于检测和区分病毒性感染与细菌性感染的即时检测分析法，其可有效地协助快速区分病毒性感染与细菌性感染。更具体地，本发明涉及一种快速地区分病毒性感染和/或细菌性感染的免疫分析方法，其中病毒标记物为干扰素诱导Mx‑B蛋白，细菌标记物为CRP/PCT/BPI。

技术领域

本发明涉及用于鉴别病毒性感染与细菌性感染的即时检测(point of care，POC)分析领域。更具体地，本发明涉及一种快速区分病毒性感染和/或细菌性感染的免疫分析法。

背景技术

发烧是导致儿童到全科诊所和儿科诊所的急诊中心就诊的常见原因。最常见的是，发烧与呼吸道感染或肠胃炎有关。儿童发烧的高发率和预防性施用不必要的抗生素，是对指示病毒性和/或细菌性感染的生物标记物进行快速筛选检测的开发的原因。

在大约60％的病例中，严重的社区获得性肺炎是由细菌性感染引起的，大约10％的患者需要进入重症监护病房(ICU)。其余40％与呼吸道病毒有关。大多数呼吸道感染涉及咽炎，其中40％由病毒引起，而25-50％由A族β溶血性链球菌引起。后者会导致急性细支气管炎和肺炎。

所有抗菌药物中约有80％会在初级治疗中被开出处方，其中多达80％的处方用于呼吸道适应症。迄今为止，呼吸道感染是初级治疗中最常见的咳嗽原因。医生经常开广谱抗生素的处方来治疗咳嗽，包括急性支气管炎，而且其中许多处方对患者的益处微乎其微，并且可能引起副作用和可能增强抗生素耐药性。促使医生施用抗生素的因素包括缺乏适当的细菌性感染诊断标记物、对患者缺乏随访的担忧以及时间压力。

快速区分病毒性感染与细菌性感染仍然具有挑战性。最近，已经鉴别了许多新的诊断标记物。这些标记物中的数种表现出区分病毒性与细菌性感染的巨大前景。这类蛋白包括Mx-GTP酶和C反应蛋白(CRP)。

Mx同源蛋白是高分子量GTP酶超家族的成员。因此，这些GTP酶由I型α/β或II型干扰素(IFN)上调。Mx GTP酶仅在IFNα/β而不在IFNγ处理的细胞中过度表达。I型干扰素在先天免疫反应中起重要作用，并具有免疫调节、抗增殖和抗病毒的功能。

发明人自己的研究表明，Mx-同源人体蛋白具有以下优点：1)在人体中的Mx-同源人体蛋白主要在细胞内表达。可以通过细胞内染色在大多数细胞室中看到它们[16]。2)Mx-同源蛋白通过剂量依赖的方式进行诱导[6]。3)Mx-同源人体蛋白由I型干扰素特异性诱导，而并非由IFN-γ、IL-I、TNF-α或细菌性感染引起的其他任何细胞因子诱导[8,12]。4)与外周血系统中的I型干扰素相比，Mx-同源人体蛋白具需要更长的检测时间[6]。因此，这些蛋白质是鉴别病毒性疾病的标记物[7,14,15]。此外，这些蛋白可用作标记物，以鉴别接受I型干扰素治疗的患者的IFN治疗是否成功[5,9,10,11]。在早期研究中，发明人通过SDS-PAGE后的Western Blotting检测到了这些蛋白质。¹²但是该过程需要两天以上。因此，发明人建立了ELISA，以在两天内检测这些蛋白质[13]。

基于这些事实和假设，即在细菌性感染患者体内I型干扰素保持在正常水平内，外周血中的Mx-同源蛋白表达是对病毒性感染灵敏且特异的标记物。同样地，据报道，大多数病毒性感染引起的急性期反应浓度很小、C反应蛋白(CRP)浓度小、降钙素原(PCT)水平低和杀菌/通透性增强蛋白(BPI)浓度小。因此，这些蛋白质将用于区分病毒源性疾病与细菌性病因疾病。由于CRP的血浆浓度在刺激后迅速增加，并以很短的半衰期迅速降低，因此CRP在诊断和监测感染和炎性疾病中可成为非常有用的工具。在斯堪的纳维亚，一般情况下，即时检测CRP测试是对呼吸道感染患者进行例行评估的一部分，其应用具有成本效益。一般情况下，已发现CRP在诊断细菌性疾病以及部分区分细菌性与病毒性感染中具有重要价值。通常发现CRP的诊断价值优于红细胞沉降率(ESR)，优于或等于白细胞计数(WBC)。即时检测的缺点是检测时间长。这些测试需要至少30分钟到2个小时。