[发明专利]新兴的核酸测序技术

权利要求书

1.一种核酸测序的方法，所述方法包括：

(a)将所述核酸以双链线性化拉伸形式固定在测试基板上，从而形成固定的拉伸双链核酸；

(b)使所述固定的拉伸双链核酸在所述测试基板上变性为单链形式，从而获得所述核酸的固定的第一链和固定的第二链，其中所述固定的第二链的相应碱基与所述固定的第一链的相应互补碱基相邻；

(c)将所述固定的第一链和所述固定的第二链暴露于寡核苷酸探针组中的相应的寡核苷酸探针的相应库中，其中所述寡核苷酸探针组中的每个寡核苷酸探针具有预定的序列和长度，所述暴露(c)在允许所述相应的寡核苷酸探针的相应库中的单个探针与所述固定的第一链或所述固定的第二链的与所述相应的寡核苷酸探针互补的部分结合并形成相应的异源双链体的条件下发生，从而产生相应的光学活性实例；

(d)使用二维成像器测量在所述暴露(c)期间发生的每个相应的光学活性实例在所述测试基板上的位置和持续时间；

(e)对所述寡核苷酸探针组中的相应的寡核苷酸探针重复所述暴露(c)和测量(d)，从而获得所述测试基板上的多组位置，所述测试基板上的每个相应组的位置对应于所述寡核苷酸探针组中的寡核苷酸探针；以及

(f)通过汇编由所述多组位置代表的所述测试基板上的位置，确定来自所述测试基板上的所述多组位置的所述核酸的至少一部分的序列。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述暴露(c)在允许所述相应的寡核苷酸探针的相应库中的单个探针与所述固定的第一链或所述固定的第二链的与所述单个探针互补的部分瞬时且可逆地结合并形成所述相应的异源双链体的条件下发生，从而产生光学活性实例。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述暴露(c)在允许所述相应的寡核苷酸探针的相应库中的单个探针与所述固定的第一链或所述固定的第二链的与所述单个探针互补的部分重复地瞬时且可逆地结合并形成所述相应的异源双链体的条件下发生，从而重复产生所述相应的光学活性实例。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述寡核苷酸探针组中的每个寡核苷酸探针都与标记物结合。

5.如权利要求1所述的方法，其中

所述暴露是在呈染料形式的第一标记物存在的情况下进行的，

所述寡核苷酸探针组中的每个寡核苷酸探针都与第二标记物结合，以及

当所述第一标记物和所述第二标记物彼此非常接近时，所述第一标记物使所述第二标记物发出荧光。

6.如权利要求1所述的方法，其中

所述暴露是在嵌入染料存在的情况下进行的，以及

所述相应的光学活性实例来自嵌入所述寡核苷酸与所述固定的第一链或所述固定的第二链之间的所述相应的异源双链体的所述嵌入染料的荧光，其中所述相应的光学活性实例大于所述嵌入染料在其嵌入所述相应的异源双链体之前的荧光。

7.如权利要求1所述的方法，其中

在所述暴露(c)的单个实例期间所述寡核苷酸探针组中多于一个寡核苷酸探针暴露于所述固定的第一链和所述固定的第二链。

8.如权利要求7所述的方法，其中

在所述暴露(c)的单个实例期间暴露于所述固定的第一链和所述固定的第二链的所述寡核苷酸探针组中的不同寡核苷酸探针与不同的标记物缔合。

9.如权利要求1所述的方法，其中在第一温度下对所述寡核苷酸探针组中的第一寡核苷酸探针进行所述暴露(c)，并且所述重复(e)所述暴露(c)和测量(d)包括在第二温度下对所述第一寡核苷酸进行所述暴露(c)和所述测量(d)。