[发明专利]胰岛细胞制备性组合物和使用方法

权利要求书

1.一种用于生成包含Pdx1阳性、NKX6.1阳性胰腺祖细胞的细胞簇的方法，所述方法包括：

使Pdx1阴性、NKX6.1阴性原始肠管细胞的群体与包含骨形态发生蛋白(BMP)信号传导途径抑制剂和来自转化生长因子β(TGF-β)超家族的生长因子的组合物接触，从而生成包含所述Pdx1阳性、NKX6.1阳性胰腺祖细胞的细胞簇，其中所述簇包含至多约30％的CHGA阳性细胞和至多约30％的CDX2阳性细胞，如通过流式细胞术所测量的。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括使所述PDX1阳性/NKX6.1阴性胰腺祖细胞分化为胰腺β细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，进一步包括使所述PDX1阳性/NKX6.1阴性胰腺祖细胞分化为PDX1阳性/NKX6.1阳性胰腺祖细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，进一步包括使所述NKX6.1阳性胰腺祖细胞分化为胰岛素阳性内分泌细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，进一步包括使所述胰岛素阳性内分泌细胞分化为胰腺β细胞。

6.一种方法，包括：

(a)使包含Pdx1阳性、NKX6.1阳性的原始肠管细胞的细胞群体与包含BMP信号传导途径抑制剂和来自TGF-β超家族的生长因子的组合物接触，从而生成包含Pdx1阳性、NKX6.1阳性胰腺祖细胞的细胞簇，以及

(b)使包含所述PDX1阳性/NKX6.1阳性胰腺祖细胞的所述细胞簇分化为包含非天然胰腺β细胞的细胞簇，

其中所述包含非天然胰腺β细胞的细胞簇具有比未与所述BMP信号传导途径抑制剂和所述来自TGF-β超家族的生长因子进行所述接触而生成的可比的细胞簇更高的葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)刺激指数。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞簇的所述GSIS刺激指数比所述可比的细胞簇高至少约1.2倍、至少约1.5倍、至少约1.8倍、至少约2倍、至少约2.2倍、至少约2.4倍、至少约2.8倍或至少约3倍。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞簇的所述GSIS刺激指数比所述可比的群体高至少约3倍。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述GSIS刺激指数计算为响应于第一葡萄糖浓度的胰岛素分泌与响应于第二葡萄糖浓度的胰岛素分泌之比。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述第一葡萄糖浓度为约10至约50mM，并且所述第二葡萄糖浓度为约1mM至5mM。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述第一葡萄糖浓度为约20mM，并且所述第二葡萄糖浓度为约2.8mM。

12.根据权利要求6-11中任一项所述的方法，其中所述细胞簇包含比所述可比的细胞簇更高百分比的所述非天然胰腺β细胞，如通过流式细胞术所测量的。

13.根据权利要求6-11中任一项所述的方法，其中所述细胞簇包含比所述可比的细胞簇高至少约1.1倍、至少约1.2倍、至少约1.3倍、至少约1.4倍或至少约1.5倍的所述非天然胰腺β细胞的百分比，如通过流式细胞术所测量的。

14.根据权利要求6-11中任一项所述的方法，其中所述细胞簇包含比所述可比的细胞簇高约1.5倍的所述非天然胰腺β细胞的百分比，如通过流式细胞术所测量的。