[发明专利]基于类芽孢杆菌属的内生孢子呈现平台、产品和方法

权利要求书

1.一种编码融合蛋白的核酸分子，其包含：(a)编码N端信号肽的第一多核苷酸序列，其可操作地连接至(b)编码与所述N端信号肽异源的多肽的第二多核苷酸序列，其中所述第一多核苷酸序列包含：

(i)包含至少15、30、45、60、75或90个核苷酸的多核苷酸序列；

(ii)与SEQ ID NO：1、3、5、7、9、19、23、25、27或29具有至少50％、60％、70％、80％或90％序列同一性的多核苷酸序列；或

(iii)包含SEQ ID NO：1、3、5、7、9、19、23、25、27或29的至少45、90、135、180、225、270、315或345个连续核苷酸的片段的多核苷酸序列；

其中所述N端信号肽能够将所述融合蛋白靶向至类芽孢杆菌属内生孢子的孢子表面。

2.权利要求1的核酸分子，其中所述片段起始于SEQ ID NO：1、3、5、7、9、19、23、25、27或29的第一个核苷酸。

3.权利要求1或2的核酸分子，其中所述第一多核苷酸序列包含与SEQ 1D NO：1、7、19或27具有至少50％、60％、70％、80％或90％序列同一性的多核苷酸序列。

4.前述权利要求中任一项的核酸分子，其中所述片段编码SEQ ID NO：2或SEQ 1D NO：8的氨基酸1-15或1-30、1-45、1-60、1-75、1-90、1-105或1-115。

5.前述权利要求中任一项的核酸分子，其中与所述N端信号肽异源的多肽包括；

(a)植物生长刺激蛋白；

(b)酶；

(c)蛋白质；

(d)与类芽孢杆菌属异源的多肽；

(e)治疗性蛋白质；或

(f)植物免疫刺激蛋白。

6.前述权利要求中任一项的核酸分子，进一步包含第三多核苷酸序列，其编码：

(a)包含一个或多个蛋白酶切割位点的多肽，其中所述多肽位于所述N端信号肽和与所述N端信号肽异源的多肽之间；

(b)包含选择性标记的多肽；

(c)包含可视化标记的多肽；

(d)包含蛋白质识别/纯化结构域的多肽；或

(e)包含柔性接头元件的多肽，其连接所述N端信号肽和与所述N端信号肽异源的多肽。

7.前述权利要求中任一项的核酸分子，其中所述类芽孢杆菌属内生孢子是类芽孢杆菌属种形成的内生孢子，所述类芽孢杆菌属种包括：类芽孢杆菌属种NRRL B-50972、土地类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌或皮奥利亚类芽孢杆菌；或

由具有16S rRNA基因的细菌形成的内生孢子，所述16S rRNA基因与类芽孢杆菌属种的16S rRNA基因有至少97、98或99％同一性。

8.前述权利要求中任一项的核酸分子，其可操作地连接至与所述第二多核苷酸序列和类芽孢杆菌属中的至少一个异源的启动子元件。

9.前述权利要求中任一项的核酸分子，其中所述第一多核苷酸序列包含：

与SEQ ID NO：1、3、5、7、9、19、23、25、27或29具有至少50％、60％、70％、80％或90％序列同一性的密码子优化的多核苷酸序列；或其片段，在相同条件下，与相应的未优化序列相比，所述密码子优化的多核苷酸序列或其片段在类芽孢杆菌属内生孢子中以更高的速率或水平表达。