[发明专利]发酵工艺

权利要求书

1.一种用微生物宿主生产目标产物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供包含自复制染色体外核酸分子的微生物宿主，所述自复制染色体外核酸分子包含第一核酸序列，所述第一核酸序列的遗传活性向所述宿主赋予优势，其中所述第一核酸序列的所述遗传活性是受控的；

b)可选地，所述自复制染色体外核酸分子包含参与所述目标产物生产的第二核酸序列，其中所述第二核酸序列的遗传活性独立于第一序列的遗传活性而是受控的；

c)在允许转化的微生物宿主将所述第一核酸序列表达至给定水平以将所述自复制染色体外分子维持在生长的微生物群体中并同时遗传控制编码所述目标产物的第二序列的条件下，培养所述转化的微生物宿主。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步包含在步骤a)之前或期间用所述自复制染色体外核酸分子转化所述微生物宿主，其中所述自复制染色体外核酸分子可选地包含步骤b)的所述第二核酸序列，由此提供包含所述自复制染色体外核酸分子的微生物宿主。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤c)条件的至少一部分使得所述第一核酸序列不表现出所述遗传活性。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，在培养步骤c)结束时纯化所述目标产物。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述目标产物是微生物生物质、所述自复制染色体外核酸分子、所述第二核酸序列的转录物、所述第二序列编码的多肽、或由所述多肽直接或间接产生的代谢物。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述微生物宿主是细菌、酵母、丝状真菌或藻类。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述第一核酸序列可操作地连接至诱导型启动子。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述第一核酸序列包含编码免疫基因的序列，所述免疫基因的表达向其宿主赋予针对培养基中存在的特定细菌素的抗性。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，由所述第一核酸序列编码的序列向其宿主赋予针对培养基中存在的至少两种不同细菌素的抗性。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述细菌素是B17、C7或ColV，并且赋予对B17的抗性的免疫力是McbG，赋予对C7的抗性的免疫力是MccE或C-末端MccE，并且赋予对ColV的抗性的免疫力是Cvi。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中，所述自复制染色体外核酸分子是质粒。

12.一种包含第一核酸序列的自复制染色体外核酸分子，所述第一核酸序列的遗传活性向微生物宿主赋予优势，其中所述第一核酸序列的遗传活性是受控的，

并且可选地包含直接或间接参与目标产物生产的第二核酸序列。

13.根据权利要求12所述的自复制染色体外核酸分子，其中，所述第一核酸序列可操作地连接至诱导型启动子。

14.根据权利要求12或13所述的自复制染色体外核酸分子，其为质粒。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的自复制染色体外核酸分子，其中，所述第一核酸序列包含编码免疫基因的序列，所述免疫基因的表达向其宿主赋予针对培养基中存在的特定细菌素的抗性。

16.根据权利要求15中任一项所述的自复制染色体外核酸分子，其中，由所述第一核酸序列编码的序列向其宿主赋予针对培养基中存在的至少两种不同细菌素的抗性。