[发明专利]周质空间中蛋白质的酵母展示

权利要求书

1.一种酵母周质展示文库，所述酵母周质展示文库包含多个酵母宿主细胞，其中每个酵母宿主细胞包含：

a)用于在酵母宿主细胞周质空间中展示的抗体，其中所展示的抗体在每个酵母宿主细胞中是不同的，使得所述多个酵母宿主细胞展示多种抗体；

b)周质锚定蛋白，其中所述周质锚定蛋白连接到所述抗体，使得所述抗体展示在所述周质空间中；以及

c)目的靶膜蛋白，其中所述目的膜蛋白定位在所述酵母宿主细胞质膜中并且是所述酵母宿主细胞周质空间中展示的所述抗体可及的。

2.根据权利要求1所述的酵母周质展示文库，其中所述抗体和所述周质锚定蛋白在复合物中通过分子结合相互作用非共价连接在一起，或者在复合物中通过共价非肽键连接。

3.根据权利要求1所述的酵母周质展示文库，其中所述抗体和所述周质锚定蛋白在融合蛋白中共价连接在一起。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的酵母周质展示文库，其中所述周质锚定蛋白还包含信号序列，所述信号序列引导所述周质锚定蛋白向所述酵母宿主细胞周质、质膜或细胞壁的转运，使得所述抗体展示在所述周质中。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的酵母周质展示文库，其中所述周质锚定蛋白包含将所述抗体伸出至所述周质中的跨越膜的跨膜结构域或膜结合蛋白结构域。

6.根据权利要求5所述的酵母周质展示文库，其中所述膜结合蛋白结构域是糖基磷脂酰肌醇(GPI)-质膜锚定结构域。

7.根据权利要求6所述的酵母周质展示文库，其中所述GPI-质膜锚定结构域是yapsinGPI质膜锚定结构域。

8.根据权利要求7所述的酵母周质展示文库，其中所述yapsin GPI质膜锚定结构域是YPS1、YPS2、YPS3、YPS4、YPS5、YPS6或YPS7 yapsin GPI质膜锚定结构域。

9.根据权利要求2所述的酵母周质展示文库，其中所述周质锚定蛋白是结合所述细胞壁的内表面，使得所述抗体被伸出至所述周质中的蛋白质。

10.根据权利要求3所述的酵母周质展示文库，其中所述周质锚定蛋白是结合所述细胞壁的内表面的将所述融合蛋白伸出至所述周质中的蛋白质。

11.根据权利要求2所述的酵母周质展示文库，其中所述周质锚定蛋白足够大而使得所述周质锚定蛋白和连接的抗体保留在所述周质中。

12.根据权利要求3所述的酵母周质展示文库，其中所述周质锚定蛋白足够大而使得所述融合蛋白保留在所述周质中。

13.一种酵母周质展示文库，所述酵母周质展示文库包含多个酵母宿主细胞，其中每个酵母宿主细胞包含：

a)用于在酵母宿主细胞周质空间中展示的抗体，其中所展示的抗体在每个酵母宿主细胞中是不同的，使得所述多个酵母宿主细胞展示多种抗体，其中所述抗体连接到信号序列，所述信号序列引导所述抗体向所述酵母宿主细胞周质、质膜或细胞壁的转运，使得所述抗体展示在所述酵母宿主细胞周质空间中；以及

b)目的靶膜蛋白，其中所述目的膜蛋白定位在所述酵母宿主细胞质膜中并且是所述酵母宿主细胞周质空间中展示的所述抗体可及的。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的酵母周质展示文库，其还包括报告系统，所述报告系统包含可操作地连接到当激活所述目的靶膜蛋白时被激活的诱导型启动子的报告基因，以便允许检测在所述抗体与所述目的靶膜蛋白结合时所述目的靶膜蛋白的活性增加或降低。

15.根据权利要求14所述的酵母周质展示文库，其中所述报告基因是营养标记、抗生素抗性标记、荧光标记、生物发光标记或反向可选择标记。