[发明专利]工程化的遍在染色质开放元件及其用途

权利要求书

1.一种分离的多核苷酸，其包含：

包含双重异向转录的启动子的延伸无甲基化CpG岛；

与所述延伸无甲基化CpG岛相邻的目的靶基因；

位于所述目的靶基因的3’端的多腺苷酸化信号；以及

可选的一个或多个选择性标记；

其中所述延伸无甲基化CpG岛在200bp范围上的GC含量为约62％至约88％。

2.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸，其中所述延伸无甲基化CpG岛在200bp范围上的GC含量为约62.5％至约87.5％、约63％至约87％、约65％至约85％、约70％至约80％或约75％至约80％。

3.一种分离的多核苷酸，其包含：

包含双重异向转录的启动子的延伸无甲基化CpG岛；

与所述延伸无甲基化CpG岛相邻的目的靶基因；

位于所述目的靶基因的3’端的多腺苷酸化信号；以及

可选的一个或多个选择性标记；

其中所述延伸无甲基化CpG岛的GC含量高于62％。

4.根据权利要求3所述的分离的多核苷酸，其中所述延伸无甲基化CpG岛的GC含量高于63％、64％、65％、70％、75％、80％或85％。

5.根据权利要求3所述的分离的多核苷酸，其中所述延伸无甲基化CpG岛的GC含量在200bp范围上。

6.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中所述双重异向转录的启动子中的至少一个包含：

a)组成型启动子；

b)诱导型启动子；

c)真核启动子；

d)原核启动子；或

e)病毒启动子。

7.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中所述双重异向转录的启动子中的至少一个包含CMV启动子。

8.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中所述双重异向转录的启动子中的至少一个包含HSV TK启动子。

9.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中所述延伸无甲基化CpG岛与SEQ IDNO:1具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。

10.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中所述延伸无甲基化CpG岛包含SEQID NO:1或由SEQ ID NO:1组成。

11.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中如果存在，则所述一个或多个选择性标记中的至少一个与所述延伸无甲基化CpG岛相邻，但是位于与所述目的靶基因相对的末端。

12.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中如果存在，则所述一个或多个选择性标记中的至少一个位于所述延伸无甲基化CpG岛与所述目的靶基因之间。

13.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中如果存在，则所述一个或多个选择性标记中的至少一个位于所述多腺苷酸化信号的近端。

14.根据权利要求13所述的分离的多核苷酸，其中所述选择性标记距所述多腺苷酸化信号的近端超过2000bp。

15.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中所述一个或多个选择性标记中的至少一个在单独的载体中。

16.根据权利要求1或3所述的分离的多核苷酸，其中所述一个或多个选择性标记中的至少一个是抗生素抗性基因。