[发明专利]在深层棒状杆菌培养中增加氨基酸产量的方法

说明书

描述了用于在深层棒状杆菌培养中提高氨基酸谷氨酸和赖氨酸产量的方法，所述方法包括向深层棒状杆菌培养中添加用过的木霉发酵液的非酶级分，其中与在没有用过的木霉发酵液的非酶级分的情况下在相同的深层培养中生长的棒状杆菌相比，在用过的木霉发酵液的非酶级分存在下生长的棒状杆菌产生的小分子量增加，其中氨基酸谷氨酸和赖氨酸产量的增加不是由于用过的木霉发酵液中的酶活性。

技术领域

本发明方法涉及通过用用过的木霉(Trichoderma)发酵液的非酶级分补充棒状杆菌(Corynebacterium)生长培养基来增加深层棒状杆菌培养中小分子产量。

背景技术

棒状杆菌是革兰氏阳性需氧杆菌，其包括可用于工业应用的成员以及人类病原体。棒状杆菌的非致病性物种用于生产氨基酸、核苷酸、类固醇、细菌素和酶。最著名的物种是谷氨酸棒状杆菌(C.glutamicum)，其产生在食品工业中以谷氨酸一钠出售的谷氨酸。基因工程化的谷氨酸棒状杆菌产生赖氨酸。棒状杆菌通常在使用葡萄糖、果糖或葡萄糖加果糖和蔗糖作为主要碳源的深层培养中生长。

木霉是存在于土壤中的丝状真菌(filamentous fungi)。许多物种被表征为机会性的、无毒的植物共生体。木霉产生多种酶，包括纤维素酶和半纤维素酶。木霉还被工程化以产生和分泌重组酶，例如过氧化氢酶、葡糖淀粉酶、漆酶等。木霉的生产率非常高，并且每升深层培养物超过100克重组酶的滴度并不少见。一些木霉酶产品作为完全肉汤产品出售，通常包括杀死的细胞。其他木霉酶产品以纯化形式出售，在这种情况下，用过的木霉生长培养基将被丢弃。

发明内容

本发明方法涉及通过用用过的木霉发酵液的非酶级分补充棒状杆菌生长培养基来增加深层棒状杆菌培养中小分子产量。所述方法的方面和实施例描述于以下独立编号的段落中。

1.在一方面中，提供了一种用于在深层棒状杆菌培养中提高小分子产量的方法，所述方法包括向深层棒状杆菌培养中添加用过的木霉发酵液的非酶级分，其中与在没有用过的木霉发酵液的非酶级分的情况下在相同的深层培养中生长的棒状杆菌相比，在用过的木霉发酵液的非酶级分存在下生长的棒状杆菌产生的小分子量增加，其中小分子产量的增加不是由于用过的木霉发酵液中的酶活性。

2.在段落1所述的方法的一些实施例中，通过过滤完全或分级的用过的木霉发酵液来产生所述用过的木霉发酵液的非酶级分。

3.在段落1所述的方法的一些实施例中，通过对完全或分级的用过的木霉发酵液进行热处理来产生所述用过的木霉发酵液的非酶级分。

4.在段落1所述的方法的一些实施例中，用于增加小分子产量的所述用过的木霉发酵液的非酶级分是添加到所述深层棒状杆菌培养中的完全或分级的用过的木霉发酵液的组分。

5.在前述段落中任一项所述的方法的一些实施例中，所述用过的木霉发酵液的非酶级分是产生重组酶的发酵的副产物。

6.在段落5所述的方法的一些实施例中，用于增加小分子产量的所述木霉发酵液的非酶级分还包含所述重组酶。

7.在段落5所述的方法的一些实施例中，从用于提高小分子产量的所述木霉发酵液的非酶级分中除去所述重组酶。

8.在段落5-7中任一项所述的方法的一些实施例中，所述重组酶是碳水化合物加工酶。

9.在前述段落中任一项所述的方法的一些实施例中，当对棒状杆菌培养进行接种时添加至少一部分用过的发酵液。

10.在前述段落中任一项所述的方法的一些实施例中，在接种木霉肉汤之后至少29小时从木霉生长培养物中收获所述用过的发酵液。

11.在前述段落中任一项所述的方法的一些实施例中，在所述肉汤中表达目的蛋白之前，从木霉生长培养物中收获所述用过的发酵液。

12.在前述段落中任一项所述的方法的一些实施例中，所述小分子是氨基酸。