[发明专利]免疫刺激性组合物

说明书

本公开涉及有效引发禽类物种中的免疫应答的免疫刺激性组合物。更具体地，这些免疫刺激性组合物包含免疫调节剂组合物和免疫刺激性寡核苷酸，其在施用时刺激toll‑样受体21。

相关申请的交叉引用

本申请要求各自在2017年12月15日提交的欧洲专利申请号EP17207740.6、EP17207746.3和EP17207750.5(其公开内容以其整体通过引用并入本文)的优先权和益处。

序列表

本申请含有已经以ASCII格式电子提交且在此以其整体通过引用并入的序列表。所述ASCII拷贝，在2018年11月30日创建，命名为BHC_168027_SL.txt，且大小为92,167字节。

发明领域

提供了用于刺激toll-样受体蛋白21(TLR21)的组合物和方法。更具体地，本文公开了免疫刺激性寡核苷酸和组合物，制备免疫刺激性寡核苷酸和组合物的方法以及刺激TLR21的方法。

发明背景

脊椎动物的免疫系统已经进化出识别入侵病原体和启动细胞信号传导途径以主动抵抗感染的分子机制。一些分子机制对特定微生物是特异性的，并且涉及生物分子，诸如识别单个病原体物种的表面抗原的抗体。不幸的是，病原体特异性的防御机制并不完全有效，因为一些动物直到感染开始后才发展任何获得性抗性，并且在一些情况下，该病原体已经进化出隐蔽手段用于逃避脊椎动物的获得性防御。

脊椎动物也更普遍地识别感染，并且这种识别导致非特异性免疫应答，诸如细胞因子表达的小幅增加。当细胞受体结合病原体相关的分子模式(PAMPs)时，可以引发这种防御。PAMP和宿主对于PAMP的同源受体之间的这种相互作用可以引发免疫应答。例如，toll-样受体蛋白21(TLR21)是哺乳动物TLR9的鸡功能同源物，并且能够识别未甲基化的CpG基序，其在微生物中的CpG含量高于脊椎动物中。已知的方法通过施用具有未甲基化的CpG基序的质粒或寡核苷酸来利用这种非特异性免疫应答途径，并且已经显示通过含有CpG基序的核酸对TLR21的活化，来活化参与对微生物感染的免疫应答的细胞信号。然而，单独施用的免疫刺激性质粒或寡核苷酸可能无法引发足以抵抗感染的应答。

大规模动物生产者迫切需要感染的抗生素治疗的替代方案。消费者向这些生产商施压以寻求不含抗生素的动物产品，并且同时，由于抗生素抗性的病原体导致的感染的发生率增加正在说明对大群体预防性施用抗生素的危险。类似地，抗生素抗性正在成为人类健康护理中的全国紧急状态。医院和医生办公室正在成为出现药物抗性细菌诸如多重抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)的起点。

因此，需要用于引发针对病原体的非特异性免疫应答的免疫刺激性组合物和方法。公开的方法和组合物针对这些和其他重要需求。

发明概述

本文公开了免疫刺激性组合物，其包含：包含核酸质粒和脂质体递送媒介物的免疫调节剂组合物；以及免疫刺激性寡核苷酸，其具有至少一个CpG基序和所述免疫刺激性寡核苷酸的5'末端处或附近的鸟嘌呤核苷酸富集的序列。

本文还公开了用于制备免疫刺激性组合物的方法，其包括：将包含核酸质粒的免疫调节剂组合物和免疫刺激性寡核苷酸组合以形成免疫刺激性组合物，将所述免疫刺激性组合物离心以生成上清液和沉淀；和分离沉淀。

进一步提供了刺激TLR21的方法，其包括将免疫刺激性寡核苷酸和免疫调节剂组合物施用于受试者，其中所述免疫刺激性寡核苷酸包含至少一个CpG基序和所述免疫刺激性寡核苷酸的5'末端处或附近的鸟嘌呤核苷酸富集的序列，且其中所述免疫调节剂组合物包含非编码核酸质粒和阳离子脂质递送媒介物。