[发明专利]CAPE-装载的靶向微囊泡癌症药物及其开发方法

权利要求书

1.一种癌症药物，其通过将药物（CAPE（咖啡酸苯乙酯））装载到细胞囊泡上获得，所述细胞囊泡是除细胞（干细胞、细胞系、引物细胞、癌细胞、从组织获得的细胞）的自身生长条件外通过改变能使细胞生长的因素例如37℃的温度、pH、5％二氧化碳和DMEM、F12、RPMI培养基而产生的。

2.一种癌症药物，其通过将药物（CAPE（咖啡酸苯乙酯））装载到细胞囊泡上获得，所述细胞囊泡是除细胞的自身生长条件外通过用其它化学物质（生长因子例如bFGF、EGF、NGF；激素例如褪黑素、胰岛素、乳铁蛋白；维生素例如抗坏血酸、叶酸；和矿物质例如钙、镁、硼）处理细胞（干细胞、细胞系、引物细胞、癌细胞、从组织获得的细胞）而产生的。

3.根据权利要求1或2的癌症药物，其用于提供对癌细胞的细胞毒效应。

4.根据权利要求3的癌症药物，其中使用微囊泡；其由通过细胞向组织细胞的分化在第12-14天而不是25-30天获得的对特定癌症类型特异的细胞产生，其中观察到所述肿瘤形成。

5.根据权利要求4的癌症药物，其中使用所述微囊泡用于装载非常低浓度的CAPE；其由于通过经受神经细胞分化的干细胞分化获得的SHSY5Y细胞的特异性特征在神经分化的早期通过在12-14天而不是25-30天时的分化携带，而由所述细胞产生的。

6.根据权利要求5的癌症药物，其中CAPE以5μM至100μM的范围被装载到经由神经细胞产生的细胞微囊泡上，目的是开发靶向SH-SY5Y成神经细胞瘤癌症的CAPE装载的微囊泡癌症药物。

7.一种根据前述权利要求中任一项的靶向SH-SY5Y成神经细胞瘤癌症的CAPE装载的微囊泡癌症药物的生产方法；所述方法包括以下步骤：

- 在培养基中接种（培养）皮肤干细胞，

- 实施特化方案，该方案能使培养基中达到足够融合度（70-80％）的细胞接种到6孔细胞培养板中，由此向细胞提供成神经细胞瘤识别的特征，从而能使其成为靶向，

- 通过将CAPE（咖啡酸苯乙酯）溶解在DMSO（二甲基亚砜）中来制备储备溶液，

- 从特化皮肤细胞中分离微囊泡，

- 将CAPE加入微囊泡中，

- 将CAPE装载的微囊泡与游离于溶液中而未装载到微囊泡上的CAPE分离，

- 获得为最终产物的靶向SH-SY5Y成神经细胞瘤癌症的CAPE装载的微囊泡癌症药物。

8.根据权利要求7的癌症药物生产方法，其中优选在37℃的温度和5％CO₂下的细胞培养箱中，在含有10％胎牛血清和1％PSA的DMEM（杜尔贝科改良伊格尔培养基）培养基中培养所述皮肤干细胞、SH-SY5Y、PNT-1A、PC-3细胞。

9.根据权利要求7的癌症药物生产方法，其中在培养基中特化所述细胞的步骤期间，制备优选含有10 ng/ml bFGF、10 ng/ml EGF、1％B7补充剂、1％ITS（胰岛素、转铁蛋白和硒）、10％谷氨酰胺和1％PSA的神经基础溶液，然后通过向6孔细胞培养板中接种的细胞给予这种特化溶液，两天一次地持续12至14天，来应用特化方案。

10.根据权利要求7的癌症药物生产方法，其中通过将45.75mg的CAPE溶解在3.22mL的DMSO（二甲基亚砜）中来制备最终浓度为约50,000μM的储备溶液。

11.根据权利要求7的癌症药物生产方法，其中，在从特化皮肤细胞中分离微囊泡的步骤中，将从培养基收集的溶液以300g离心10分钟以去除废细胞。

12.根据权利要求11的癌症药物生产方法，其中，将离心后残留在试管上部的上清液转移至新试管中，并以14000g离心30分钟以去除可能的细胞组分。