[发明专利]用于体外和体内基因表达的核酸构建体

权利要求书

1.一种核酸构建体，其包括合成的非编码DNA序列(i)，所述序列包括第一DNA片段和第二DNA片段，其中所述第一DNA片段是源自大肠杆菌(Escherichia coli)glp基因的5'-非翻译区(5'-UTR)的DNA序列，所述第二DNA片段是DNA序列CAAGGAGGAAACAGCT(SEQ ID NO：10)或所述序列的变体，并且其中第一片段位于第二片段的上游。

2.根据权利要求1所述的核酸构建体，其进一步包括启动子DNA序列(ii)，其中所述启动子DNA与所述合成的非编码DNA序列(i)可操作地连接，并且位于所述合成的非编码DNA序列(i)的第一DNA片段的上游。

3.根据权利要求1或2所述的核酸构建体，其进一步包括编码DNA序列(iii)，其中所述编码DNA序列(iii)与所述合成的非编码DNA序列(i)可操作地连接，并且位于所述合成的非编码DNA序列(i)的第二片段的下游。

4.根据权利要求1、2或3所述的核酸构建体，其中所述合成的非编码DNA序列(i)的第一DNA片段源自大肠杆菌的glpF、glpA或glpD基因的5'UTR DNA序列。

5.根据权利要求1、2或3所述的核酸构建体，其中所述合成的非编码DNA序列(i)的第一DNA片段在glp基因的转录起始下游包括约5至约65个连续核苷酸。

6.根据权利要求5所述的核酸构建体，其中所述基因是glpF。

7.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述第一DNA片段是SEQ IDNO：36或其片段，或者包括SEQ ID NO：36或其片段。

8.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述构建体包括SEQ ID NO：10的变体，所述变体选自SEQ ID NO：13-22中的任一个。

9.根据前述权利要求2-10中任一项所述的核酸构建体，其中所述启动子DNA序列(ii)是源自天然地启动大肠杆菌的glpFKX、glpABC、glp D或glpTQ操纵子的转录的启动子DNA序列。

10.根据权利要求9所述的核酸构建体，其中所述启动子DNA序列(ii)具有选自SEQ IDNO：12-35、50-53中确定的任何核苷酸序列的序列，或者所述启动子DNA序列(ii)是所述序列的片段或变体。

11.根据前述权利要求中任一项所述的核酸构建体，其中所述编码DNA序列(iii)编码蛋白质或RNA。

12.根据权利要求11所述的核酸构建体，其中所述蛋白质或RNA具有对于在重组生物体中产生一种或更多种人乳寡糖(HMO)必要或有益的功能。

13.根据前述权利要求中任一项的核酸构建体，其中所述构建体是整合在重组生物体的基因组或质粒DNA中的表达盒。

14.一种重组细胞，其包括一种或更多种根据权利要求1-13中任一项所述的核酸构建体。

15.根据权利要求14所述的重组细胞，其中所述细胞是细菌细胞。

16.重组细胞，其中所述细菌细胞是大肠杆菌。

17.根据权利要求14-16中任一项所述的重组细胞，其中所述细胞包括多于一个拷贝的相同核酸构建体。

18.根据权利要求15-16中任一项所述的重组细胞，其中所述细胞包括至少两种不同的核酸构建体。