[发明专利]用于治疗2A型乌谢尔综合征的材料和方法

权利要求书

1.一种用于编辑人细胞中的USH2A基因的方法，所述方法包括：

将一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)核酸内切酶引入人细胞内，从而实现在USH2A基因或编码USH2A基因的调节序列的DNA序列内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致校正，从而产生编辑的人细胞。

2.一种用于编辑含有IVS40突变的USH2A基因的方法，所述方法包括：

将一种或多种DNA核酸内切酶引入人细胞内，从而实现在USH2A基因的内含子40内或附近的一个或多个SSB或DSB，其导致校正，从而产生编辑的人细胞。

3.权利要求2的方法，其中所述IVS40突变位于USH2A基因的内含子40内。

4.一种用于治疗2A型乌谢尔综合征患者的体内方法，所述方法包括：编辑患者的细胞中含有IVS40突变的USH2A基因。

5.权利要求4的方法，其中所述编辑包括：

将一种或多种DNA核酸内切酶引入细胞内，以实现在USH2A基因的内含子40内或附近的一个或多个SSB或DSB，其导致校正并且导致usherin蛋白功能的恢复。

6.权利要求4-5中任一项的方法，其中所述IVS40突变位于USH2A基因的内含子40内。

7.权利要求1-2或5中任一项的方法，其中所述一种或多种DNA核酸内切酶是Cas1、Cas1B、Cas2、Cas3、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csn1和Csx12)、Cas100、Csy1、Csy2、Csy3、Cse1、Cse2、Csc1、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmr1、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csb1、Csb2、Csb3、Csx17、Csx14、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csx1、Csx15、Csf1、Csf2、Csf3、Csf4或Cpf1核酸内切酶；其同源物，其天然存在的分子的重组，其密码子优化的或其修饰形式，及其组合。

8.权利要求7的方法，其中所述方法包括将编码一种或多种DNA核酸内切酶的一种或多种多核苷酸引入细胞内。

9.权利要求7的方法，其中所述方法包括将编码一种或多种DNA核酸内切酶的一种或多种核糖核酸(RNA)引入细胞内。

10.权利要求8或9中任一项的方法，其中所述一种或多种多核苷酸或者一种或多种RNA是一种或多种修饰的多核苷酸或者一种或多种修饰的RNA。

11.权利要求7的方法，其中所述DNA核酸内切酶是一种或多种蛋白质或多肽。

12.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法进一步包括：将一种或多种向导核糖核酸(gRNA)引入细胞内。

13.权利要求12的方法，其中所述一种或多种gRNA是单分子向导RNA(sgRNA)。

14.权利要求12-13中任一项的方法，其中所述一种或多种gRNA或者一种或多种sgRNA是一种或多种修饰的gRNA或者一种或多种修饰的sgRNA。

15.权利要求11-13中任一项的方法，其中所述一种或多种DNA核酸内切酶与一种或多种gRNA或者一种或多种sgRNA预复合。

16.前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括：将多核苷酸供体模板引入细胞内，所述多核苷酸供体模板包含野生型USH2A基因或cDNA的至少一部分。