[发明专利]用于单细胞和集合细胞的多重测量的系统和方法在审
| 申请号： | 201880092114.X | 申请日： | 2018-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN112004920A | 公开（公告）日： | 2020-11-27 |
| 发明（设计）人： | N·萨里格拉玛;A·萨特帕西;H·Y·昌;M·M·戴维斯 | 申请（专利权）人： | 斯坦福大学托管董事会 |
| 主分类号： | C12M1/00 | 分类号： | C12M1/00;C12N15/09;C12P19/34 |
| 代理公司： | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人： | 李程达 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 单细胞 集合 细胞 多重 测量 系统 方法 | ||
1.一种处理免疫细胞的方法，其包括：
(a)捕获免疫细胞，其中所述免疫细胞包含基因组脱氧核糖核酸(gDNA)和信使核糖核酸(mRNA)分子；
(b)使来自所述免疫细胞的gDNA与转座酶接触以在标记反应中产生标记的gDNA片段；和
(c)从所述mRNA分子产生互补DNA(cDNA)分子，其中所述cDNA分子包含对应于所述免疫细胞的基因组的V(D)J区的序列。
2.权利要求1所述的方法，其中所述免疫细胞是T细胞。
3.权利要求1所述的方法，其中所述免疫细胞是B细胞。
4.权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述捕获包括在区室中进行分区。
5.权利要求4所述的方法，其中所述区室是腔室。
6.权利要求4所述的方法，其中所述区室是孔。
7.权利要求4所述的方法，其中所述区室是液滴。
8.权利要求1至7中任一项所述的方法，其还包括在(b)之前，裂解所述免疫细胞。
9.权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述捕获包括从多个免疫细胞中分离所述免疫细胞。
10.权利要求9所述的方法，其中所述分离包括流式细胞术分选或磁性细胞分选。
11.权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述标记的gDNA片段各自包含一个或多个衔接子。
12.权利要求11所述的方法，其中所述一个或多个衔接子包含衔接子序列。
13.权利要求1-12中任一项所述的方法，其中(c)包括使来自所述免疫细胞的所述mRNA分子与引物和逆转录酶接触。
14.权利要求13所述的方法，其中所述引物包含以下序列：特异于所述mRNA分子的序列或靶向所述mRNA分子的序列。
15.权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述mRNA分子包含T细胞受体α(TRA)或T细胞受体β(TRB)RNA分子。
16.权利要求15所述的方法，其中所述mRNA分子包含T细胞受体α(TRA)和T细胞受体β(TRB)RNA分子。
17.权利要求15或16所述的方法，其中(c)包括使mRNA分子与引物接触，其中所述引物包含以下序列：特异于编码所述TRA和TRB RNA分子的恒定区的序列或靶向编码所述TRA和TRB RNA分子的恒定区的序列。
18.权利要求1-17中任一项所述的方法，其还包括使所述标记的gDNA片段和所述cDNA分子与多个引物和聚合酶接触以产生标记的gDNA片段扩增子或cDNA分子扩增子。
19.权利要求18所述的方法，其还包括使所述标记的gDNA片段和所述cDNA分子与多个引物和聚合酶接触以产生标记的gDNA片段扩增子和cDNA分子扩增子。
20.权利要求18或19所述的方法，其中所述多个引物的至少一个子集各自包含以下序列：特异于编码T细胞受体(TCR)的恒定区或可变区的序列或靶向编码T细胞受体(TCR)的恒定区或可变区的序列。
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