[发明专利]用衍生自肿瘤细胞的微囊泡进行疫苗接种以治疗癌症

说明书

本发明涉及衍生自天然肿瘤细胞和在如辐射的压力刺激下体外产生的肿瘤细胞的微囊泡，所述微囊泡可以有效地用作癌症的治疗性疫苗。本发明还涉及含有所述微囊泡的治疗性疫苗调配物，其制备方法，以及其作为治疗性疫苗刺激抗肿瘤免疫系统和治疗癌症的医学用途。

技术领域

本发明涉及健康领域，特别是涉及有可能用来自肿瘤细胞的微囊泡进行治疗的脑癌和其它肿瘤的领域。

背景技术

胶质瘤是成人中最常见的原发性脑肿瘤，是白血病之后儿童患癌症的第二大原因，每10万居民中有22例发病(1)，仅在美国每年就造成超过15,000例死亡(2)。世界卫生组织(WHO)根据它们与胶质细胞的组织学相似性，将其分类为星形细胞瘤、少突星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤。根据其生物学性质和恶性程度，将其分为4级(I到IV级)，其中胶质母细胞瘤(GBM)是最严重的(3)，在脑部和中枢神经系统的所有恶性肿瘤中最常见(4)。在墨西哥国家神经病学和神经外科研究所(National Institute of Neurology and Neurosurgeryof Mexico，INNN，缩写按西班牙语)中，GBM占所有脑肿瘤的9％，占原发胶质瘤的45.7％，平均年龄为51岁，男性发病率高于女性(1.8:1)(5,6)。

GBM的当前标准治疗由以下组成：彻底的外科手术切除，然后是放射疗法和化学疗法，化学疗法基于使用替莫唑胺(Temozolamide)；然而，平均生存期为14.6个月，只有5.1％的患者生存期超过5年，这一观点在过去的20年中没有改变(4,7)。当前，新的治疗策略集中在更好地理解脑肿瘤的生物学上，其中在神经肿瘤学中研究模糊的领域是以细胞外囊泡(EV)的形式进行的细胞外囊泡运输(8)。

在过去的十年中，对细胞外囊泡的研究显著增加，并考虑了其在抗肿瘤疫苗接种中的应用(9)。这些囊泡是脂质双层膜粒子，可组成性地或响应压力从大多数细胞(包括肿瘤细胞)释放，并且可以从各种体液中分离出来，这些体液如：血液、尿液、唾液、母乳、羊水、腹水、精液和脑脊液(10)。

EV的释放最初由查加夫(Chargaff)和威斯特(West)在1946年报道，是正常血浆中血小板衍生的促凝粒子(11)，后来在1967年被伍尔夫(Wolf)称为“血小板尘埃(plateletdust)”，伍尔夫注意到凝结物质的形式为小粒子，可以通过高速离心沉淀，且周围是活化的血小板(12)。1978年，当用电子显微镜在患有霍奇金病(Hodgkin's disease)的患者的脾脏和淋巴结培养物中通过电子显微镜鉴定出EV时，首次在癌症患者中记录了EV(13)。

微囊泡(MV)(也称为微米粒子或外泌体)代表EV的特定亚型。它们是尺寸不等的非均匀粒子，尺寸范围从200nm到大于1μm，并通过裂变朝着质膜的外部释放到细胞外空间(14,15)。产生MV的确切机制尚未完全了解，但已知膜脂质不对称性会损失(16)。在微囊泡释放的位置，通常在膜的细胞质一侧发现的磷脂酰丝氨酸氨基磷脂被重新定位到外层，同时膜蛋白的拓扑结构保持完整(17)。

MV的重要性在于它能够将其内含物局部地或全身地转移到其它细胞。一旦由供体细胞产生，MV可以：1)通过受体与靶细胞表面结合；2)与靶细胞膜融合，并将其内含物排放到细胞质中；或3)通过胞吞作用被细胞吸收，在被胞吞后可以保持在内体中分离，并最终与溶酶体融合。或者，MV可以将其膜与内体的膜融合，然后将其内含物排放到细胞质中(水平转移)，或完整排放到外部(转胞吞作用)(14)。

微囊泡的组成很大程度上取决于它们起源的细胞类型，尽管微囊泡的膜组成与亲代细胞的膜组成不同，存在显著的重塑作用(15)。与癌症有关的MV中存在的分子含有大量的生物活性分子，其包括与免疫调节有关的抗原、跨膜受体和配体、癌蛋白和肿瘤抑制蛋白、脂质、信使RNA、微小RNA以及基因组和线粒体DNA(18)。这些MV可以与多种细胞类型融合并相互作用，从而修饰并建立转移前的生态位、细胞入侵、血管生成(19)和先天免疫调节(20)。