[发明专利]经过蓄积NADH的反应途径从起始物质制造目标物质的方法

说明书

一种经过蓄积NADH的反应途径从起始物质制造目标物质的方法，所述方法包括：在好氧条件下培养细菌；以及随后对所述细菌在所述起始物质与硝酸根离子的存在下、在厌氧条件下进行培养，从而生产所述目标物质。

技术领域

本发明涉及一种经过蓄积NADH的反应途径从起始物质制造目标物质的方法。

背景技术

目前，在好氧条件下进行细菌的增殖培养、随后在厌氧条件下进行物质生产的发酵技术主要使用棒状杆菌属菌来进行(乾M(Inui M)、村上S(Murakami S)、冲野S(OkinoS)、川口H(Kawaguchi H)、韦尔特A.A.(Vertes A.A.)、汤川H(Yukawa H)，分子微生物学与生物技术杂志(Journal of Molecular Microbiology and Biotechnology，J MolMicrobiol Biotechnol).2004；7(4)：182-196.)。所述发酵技术也使用大肠杆菌来进行(维穆里G.N.(Vemuri G.N.)、艾特曼M.A.(Eiteman M.A.)、阿特曼E.(Altman E.)，应用及环境微生物学(Applied and Environmental Microbiology，Appl Environ Microbiol).2002年4月(2002Apr)；68(4)：1715-1727.)。关于上述发酵技术，由于在好氧条件下细菌进行增殖，因此可制备高浓度的菌体，且由于在厌氧条件下实质上不发生细菌的增殖，因此可效率良好地进行物质生产，就上述方面而言优异。

发明内容

本发明的目的在于提供一种使用细菌、经过蓄积还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide reduced，NADH)的反应途径从起始物质效率良好地制造目标物质的方法。

根据一个方面，提供一种经过蓄积NADH的反应途径从起始物质制造目标物质的方法，所述方法包括：

在好氧条件下培养细菌；以及

随后对所述细菌在所述起始物质与硝酸根离子的存在下、在厌氧条件下进行培养，从而生产所述目标物质。

根据本发明，提供一种使用细菌、经过蓄积NADH的反应途径从起始物质效率良好地制造目标物质的方法。

附图说明

图1是表示棒状细菌生产丙酮酸或经由丙酮酸作为中间代谢物来进行生物合成的化合物的工艺的示意图。

图2是表示大肠杆菌生产丙酮酸或经由丙酮酸作为中间代谢物来进行生物合成的化合物的工艺的示意图。

具体实施方式

以下对本发明进行详细说明，但以下的说明旨在详细地说明本发明，并未意图限定本发明。

1.目标物质的制造方法

关于当利用细菌的糖酵解体系在厌氧条件下从葡萄糖生产丙酮酸时妨碍丙酮酸的生产效率的原因，本发明者推测如下。在糖酵解体系的反应途径中从葡萄糖生产丙酮酸的期间，从1摩尔的葡萄糖生产2摩尔的NADH，但不存在消耗NADH的反应，因此NADH在菌体内蓄积。但是，在厌氧条件下的物质生产中，培养液中溶解氧的量少，无法利用氧将细菌所生产的NADH氧化。菌体内所蓄积的NADH阻碍生产NADH的酶(3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH))的活性，妨碍糖酵解体系的反应的顺利进行，其结果，防碍了丙酮酸的生产效率。

本发明者基于上述推测，发现通过添加硝酸盐，与丙酮酸的生产一起进行利用硝酸呼吸消耗NADH的反应，结果可提高丙酮酸的生产效率。