[发明专利]一种金银花的品种改良方法

权利要求书

1.一种金银花的品种改良方法，其特征在于：该改良方法的具体步骤如下：

S1：采用山东四季金银花与本地具有一种开花周期、凋谢时间长的金银花品种进行品种杂交；

S2：将杂交后的金银花种子在4月份播种，在播种前将种子在35～40℃温水中浸泡24h，取出拦2～3倍湿沙催芽，等裂口达30％左右时播种；

S3：在播种时，在畦上按行距21～22cm开沟播种，覆土1cm，每2天喷水1次，10余日即可出苗，秋后或第2年春季移栽，每1h㎡用种子15kg左右；

S4：最后以种植所繁殖的实生苗进行扦插育苗。

2.根据权利要求1所述的一种金银花的品种改良方法，其特征在于：所述步骤S1中，杂交的流程如下：

S11：以本地金银花作为母本，山东金银花作为父本，在开花前1～2d，除去本地金银花的雄蕊，用塑封袋套袋后，挂上标签；

S12：在当日傍晚17时左右采集山东金银花花粉，并贮藏于4℃的冰箱中低温保存；

S13：翌日早上8时，对前天去雄的本地金银花授粉，至第三日早上8时再授粉一次，每次授粉后都要套袋；

S14：到11月份作用，收集成熟的金银花浆果，用清水将其表面灰尘清除，在无菌操作台上从浆果中取出种子；

S15：将杂交后的金银花种子用75％乙醇溶液浸泡60s后，再用次氯酸钠溶液表面消毒20min，无菌水漂洗三次后，接种在MS+GA₃5.0mg/L萌发培养基上，置于25℃温室中培养，每天光照24h；

S16：通过金银花种子的萌发获得无菌苗，在无菌苗株系扩大繁殖后，用过氧化物POD同工酶分析鉴定其杂种性。

3.根据权利要求2所述的一种金银花的品种改良方法，其特征在于：所述步骤S16中，杂种性鉴定的方法为：

S161：对金银花无菌苗株系精确称取0.5g试管苗的嫩叶，置于预冷的研钵中，再加入0.3ml预冷的提取缓冲液，在冰上研磨至匀浆后，用冷冻离心12000r/min条件下离心20min，吸取上清液到EP管中，提取蛋白质；

S162：提取蛋白质提取液20μL，加入同体积的缓冲液，混匀后，ongoing微量进样针上样30μL，先在10mA条件下电泳，当溴酚蓝带跑至浓缩胶底部时，调节电压到20mA，整个电泳过程在4℃的低温下进行，电泳完成后，取出胶带，染色30min，当出现清晰的蓝色条带时，用9％的醋酸溶液固定并拍照。

4.根据权利要求3所述的一种金银花的品种改良方法，其特征在于：所述的缓冲液由0.05mol/L Tris-HCL缓冲液和20％的甘油混合而成。