[发明专利]一种人树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种人树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)从分离的外周血单核细胞中获取单核细胞；

2)诱导单核细胞向DC分化；

3)诱导已分化为未成熟DC的单核细胞成为成熟DC，并在此过程中，加入肿瘤抗原和DC促成熟剂；

4)继续培养1-2天，得到人树突状细胞肿瘤疫苗，

其中，所述DC促成熟剂为IL-1β、TNF-α、IFN-γ及人重组蛋白gp100的组合形成的DC促成熟剂组合。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述DC促成熟剂组合中，IL-1β的浓度为15ng/mL，TNF-α的终浓度为1000U/mL，IFN-γ的终浓度为1000U/mL，gp100的浓度为60μg/mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：

a)采用聚底糖一泛影葡糖胺密度梯度离心法获得外周血单个核细胞；

b)然后将外周血单个核细胞重悬于PAA^TM培养基中，调整细胞密度为(1～2)×10⁶个/mL，进行贴壁培养1-2h；

c)轻轻晃动培养装置，使未贴壁细胞重新悬浮，然后吸弃悬浮的未贴壁细胞，补加培养基，轻轻晃动培养装置，使未贴壁细胞重新悬浮，然后吸弃悬浮的未贴壁细胞，重复1～2次，获得贴壁细胞即为单核细胞。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)具体包括：将有8-10％自体血浆、800-1000IU/ml GM-CSF、800-1000IU/ml IL-4的AIM-V^TM培养基加入步骤1)中获得单核细胞培养装置内，继续培养2-3天。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)具体包括在诱导已分化为未成熟DC的单核细胞成为成熟DC的过程中，依次加入所述肿瘤抗原和所述DC促成熟剂组合。

6.根据权利要求1-5任一所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤抗原选自肿瘤抗原选自CD19、CD20、WT-1、MUC1、LMP2、HPV E6E7、EGFRvIII、HER-2/neu、Idiotype、MAGE A3、p53、NY-ESO-1、PSMA、GD2、CEA、MelanA/MART1、Ras mutant、gp100、p53mutant、Proteinase3、bcr-abl、Tyrosinase、Survivin、PSA、hTERT、Sarcoma、EphA2、PAP、ML-IAP、AFP、EpCAM、ERG、NA17、PAX3、ALK、Androgen receptor、Cyclin B1、Polysialic acid、MYCN、RhoC、TRP-2、GD3、Fucosyl GM1、Mesothelin、PSCA、MAGE A1、sLe(animal)、CYP1B1、PLAC1、GM3、BORIS和Tn中的至少一种。

7.一种能够诱导已分化为未成熟DC的单核细胞成为成熟DC的DC促成熟剂，其特征在于，所述DC促成熟剂为IL-1β、TNF-α、IFN-γ及人重组蛋白gp100的组合形成的DC促成熟剂组合。

8.根据权利要求7所述的DC促成熟剂，其特征在于，在所述DC促成熟剂组合中，IL-1β的浓度为15ng/mL，TNF-α的终浓度为1000U/mL，IFN-γ的终浓度为1000U/mL，gp100的浓度为60μg/mL。