[发明专利]一种同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法

权利要求书

1.一种同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液制备：分别精密称取薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷的对照品适量，置于同一个量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成每1ml含1mg薯蓣皂苷、1mg伪原薯蓣皂苷、1mg原薯蓣皂苷、1mg甲基原薯蓣皂苷的对照品混合溶液；

(2)供试品溶液制备：精密称取穿山龙药材粉末1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入30ml甲醇，浸泡10min，称定重量，超声提取3次，每次30min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，合并提取液减压浓缩，定容至10ml，用微孔滤膜过滤，制成供试品溶液；

(3)高效液相色谱分析：采用高效液相色谱法进行测定，具体条件如下：色谱柱：XBridge C18，250mm×4.6mm，5μm；以乙腈为流动相A，水为流动相B进行梯度洗脱，洗脱程序为：0～5min,5％A；5～15min,5％～15％A；15～55min,15％～45％A；55～65min,45％～100％A；65～80min,100％A；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；检测波长：208nm；柱温：30℃；

(4)标准曲线制作：精密吸取对照品混合溶液5ml、2.5ml、1.25ml，分别置于10ml的量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成系列对照品混合溶液0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml；按照步骤(3)的色谱条件进样分析，记录色谱峰面积；以对照品混合溶液质量浓度为横坐标(X，mg/ml)，以峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线，得薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷的回归方程分别为：Y＝2E+06X+11088，R²＝0.9998；Y＝3E+06X+43594，R²＝0.9993；Y＝940645X+23904，R²＝0.9976；Y＝904003X+114.13，R²＝0.9946；

(5)样品含量测定：精密吸取供试品溶液，按步骤(3)的色谱条件测定，利用步骤(4)的标准曲线，用外标法以峰面积计算薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷的含量。

2.根据权利要求1所述的同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，超声功率为250W，频率为400kHz。

3.根据权利要求1所述的同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述微孔滤膜的孔径为0.45μm。

4.根据权利要求1所述的同时测定不同产地穿山龙药材中四种活性成分含量的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述穿山龙药材粉末的粒径为50～100目。