[发明专利]一种多重检测化疗药物毒性相关基因分型的试剂盒

说明书

本发明提供了一种多重检测化疗药物毒性相关基因分型的试剂盒，具体的本发明提供了一种利用多重不对称PCR技术及电化学基因传感器法检测多重化疗药物毒性相关基因分型的试剂盒及其检测方法，实验结果表明，本发明的检测方法和试剂盒检测准确性好、特异性高，而且具有操作简单、自动化、通量较高的优势，能够为肿瘤患者的如铂类药物、紫杉醇类药物、5‑氟尿嘧啶等多种临床上常用化疗药物的用药指导提供了重要参考。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种利用多重不对称PCR技术及电化学基因传感器法检测多重化疗药物毒性相关基因分型的试剂盒及其检测方法。

背景技术

如今肿瘤化学药物治疗已经在临床上得以广泛应用，但目前临床应用于肿瘤治疗的“标准化疗”方案是建立在群体样本研究的基础上，以循证医学为依据的，这种治疗方法的局限性在于其无法有效地考虑肿瘤和宿主基因的多态性，无法有效地预测药物对肿瘤的疗效以及可能导致的一些毒性反应。对同一类型的肿瘤采用标准的治疗方案，尚未实现个体化，半数以上肿瘤患者接受的可能是无效的化疗，却要为此承受药物的毒副作用、经济的负担以及病情的恶化。

随着对肿瘤化疗药物的研究，人们发现一些药物的疗效和毒副作用和一些基因位点紧密相关，其机理往往是若干位点的变化使药物代谢基因的活性下降，有些则直接造成该基因活性的丧失，从而使药物代谢产生障碍并引起一系列严重的化疗毒副反应。但肿瘤本身以及不同病人之间存在异质性，常会导致患者对“标准化疗”的敏感性和毒副作用差异很大。因此，在临床肿瘤治疗前，检测患者的相关基因，预测抗肿瘤药物的疗效及毒副作用，合理选择化疗药物，实现个体化治疗就能从根本上缓解肿瘤患者的痛苦，改善病人的生存质量，并提高其在化疗过程中的生存概率。

目前常用的SNP基因分型检测方法有实时荧光PCR法、PCR-Sanger测序法、PCR-高分辨率熔解曲线(HRM)法、PCR-基因芯片法等。

实时荧光PCR法灵敏度高，分型准确，操作简便快捷，所用仪器容易普及，易于推广使用。但该方法通量不高，探针成本较高，单个位点的检测成本与样本量有关，样本量越小，成本越高。

PCR-Sanger测序法属于定性检测，优点是测序长度较长，可发现新的变异位点。主要不足：灵敏度不高，尤其是在进行肿瘤组织体细胞突变检测时，当组织中靶标基因突变比例低于20％时，可能出现假阴性结果；对试剂和仪器有特殊要求，不易普及；操作复杂，成本相对较高，速度慢、通量低。

PCR-高分辨率熔解曲线(HRM)法操作简便、快速、通量大、使用成本低、结果准确，有利于实现闭管操作，在进行甲基化检测时可根据熔解曲线确定甲基化程度的高低。该方法的缺点是：不能排除待测核酸中新出现的遗传变异；由于单个碱基突变导致DNA解链温度的变化非常小，该方法对仪器的灵敏度和分辨率有较高要求。

因此，本领域技术人员致力于开发准确度高、操作简单，可同时检测多种化疗药物毒性相关基因的SNP位点的新分子诊断方法，以指导多种化疗药物个体化用药。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于多重不对称PCR-电化学基因传感器法检测多重化疗药物毒性相关基因分型的试剂盒。

在本发明的第一方面，提供了一种检测化疗药物毒性相关基因分型的引物对组，所述引物对组包括第一引物对集，所述第一引物对集包括选自以下引物对一至引物对九中的一种或多种引物对：

引物对一：

1F：SEQ ID NO.:1；1R：SEQ ID NO.:2

引物对二：

2F：SEQ ID NO.:3；2R：SEQ ID NO.:4

引物对三：

3F：SEQ ID NO.:5；3R：SEQ ID NO.:6；

引物对四：