[发明专利]一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法

权利要求书

1.一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）外植体的取材：5~6月份，取4~5年生百子莲未开裂的小花苞，在无菌操作台上进行消毒处理，然后用ddH₂O冲洗3~5次，用无菌滤纸吸干小花苞表面的水分，然后切取小花梗外植体，将小花梗外植体切成0.7~1.0 cm的小段；

（2）愈伤组织的诱导：取0.7~1.0 cm的小花梗外植体小段，平放状态接种于愈伤组织诱导培养基中，22~28℃暗培养12~18 d，可见白色半透明的愈伤组织生成，30d天后进行愈伤组织的继代培养；

（3）愈伤组织的继代培养：取带有残留小花梗组织的愈伤组织细胞团，放置在愈伤组织继代培养基上，22~28℃暗培养，以60 d为一个继代周期，继代培养2次，愈伤组织逐渐转变为微黄色；

（4）胚性愈伤组织的诱导：取不含残留小花梗组织的愈伤组织，放置在胚性愈伤组织诱导培养基上，22~28℃暗培养，60 d后，微黄色愈伤组织表面出现单细胞起源的胚性愈伤组织；

（5）胚性细胞的成熟胚诱导：取0.5 g胚性愈伤组织，放置在成熟胚诱导培养基上，22~28℃光照培养，得到成熟胚；

（6）体胚苗的诱导：取0.25 g成熟胚组织，放置在体胚苗诱导培养基上，22~28℃光照培养，30 d后得到带有根系的体胚苗；

步骤（2）中，所述愈伤组织诱导培养基组分为：MS + 2.0 mg∙L^-1 PIC + 3%蔗糖 + 1%琼脂，pH5.8；

步骤（3）中，所述愈伤组织继代培养基组分为：MS + 1.5 mg∙L^-1 PIC + 3%蔗糖 + 1%琼脂，pH5.8；

步骤（4）中，所述胚性愈伤组织诱导培养基组分为：MS + 1.5 mg∙L^-1 PIC + 3%蔗糖 +1%琼脂，pH5.8；

步骤（5）中，所述成熟胚诱导培养基的组分为：MS + 2%蔗糖 + 1%麦芽糖 + 1%琼脂，pH5.8；

步骤（6）中，所述体胚苗诱导培养基的组成为：MS + 2%蔗糖 + 多效唑0.5 mg·L^-1 +0.6 %琼脂，pH5.8。

2.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述消毒处理的方法是：先在75%的乙醇溶液里浸渍1 min，接着用ddH₂O冲洗3~5次，然后在2%的次氯酸钠溶液里浸渍5 min。

3.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤（5）中，所述光照培养的光照强度为2500 lx。

4.如权利要求1至3任一项所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述光照培养的光照强度为3500 lx。