[发明专利]一株变形假单胞菌ABC转运蛋白基因沉默菌株

说明书

本发明提供一株变形假单胞菌ABC转运蛋白基因沉默菌株，所述菌株为Pseudomonas plecoglossicida ABC‑shRNA‑RNAi，已于2018年11月12日于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO：M2018771，本发明通过比较转录组学分析技术，结合RNA干扰这一定向高效的基因沉默技术，构建一株变形假单胞菌ABC转运蛋白基因（L321_23611）稳定沉默菌株，并对该菌株的毒力效果进行检测。所构建的变形假单胞菌L321_23611基因稳定沉默菌株不仅可用于研究变形假单胞菌的致病机理，还可用于研制变形假单胞菌的弱毒疫苗并为海水鱼“内脏白点病”的预防和治疗寻找新的靶点。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，更具体涉及一株变形假单胞菌ABC转运蛋白基因沉默菌株。

背景技术

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼、斜带石斑鱼等海水养殖鱼类“内脏白点病”的病原菌，每年造成的直接经济损失超亿元。

ABC转运蛋白（ATP Binding Cassette transporters）是一个成员众多的膜蛋白超家族。从细菌到人类，它们通过细胞膜的渗透性屏障运输分子。运输的分子类型极其多样化，从离子、小到中型分子（糖、氨基酸、脂质、离子金属）到大且笨重的化合物（多肽、蛋白质、有机金属复合物和抗生素）。它们参与了许多重要的生理过程，如营养导入、细胞解毒、脂质稳态、信号转导、抗病毒防御和抗原表达。原核生物中，既存在向内转运蛋白又存在向外转运蛋白，这些蛋白在多种生理过程中都发挥着重要的作用。这些蛋白的失活会对细胞的生存产生致命的影响。许多ABC转运蛋白在特定条件下，对细菌的生存能力、毒性以及致病性有着重要的影响。ABC转运蛋白还可以介导铁的运输，这一作用对微生物的毒性有着重要的作用。

本发明通过比较转录组学分析技术，结合RNA干扰这一定向高效的基因沉默技术，构建一株变形假单胞菌ABC转运蛋白基因（L321_23611）稳定沉默菌株，并对该菌株的毒力效果进行检测。所构建的变形假单胞菌L321_23611基因稳定沉默菌株不仅可用于研究变形假单胞菌的致病机理，还可用于研制变形假单胞菌的弱毒疫苗并为海水鱼“内脏白点病”的预防和治疗寻找新的靶点。

发明内容

本发明的目的在于提供一株变形假单胞菌ABC转运蛋白基因沉默菌株。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株变形假单胞菌ABC转运蛋白基因沉默菌株，所述菌株为Pseudomonas plecoglossicida ABC-shRNA-RNAi，已于2018年11月12日于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO：M2018771，地址为中国武汉，武汉大学。

本发明提供的这株变形假单胞菌L321_23611基因稳定沉默菌株是通过以下方法进行构建：

（1）通过比较转录组学分析技术，将筛选致病功能基因目标锁定L321_23611基因；所述的L321_23611基因序列如SEQ ID NO.1所示。

（2）合成shRNA，退火后连入pCM130/tac载体，通过电转技术导入变形假单胞菌感受态细胞，构建变形假单胞菌L321_23611基因稳定沉默菌株；利用QPCR技术，对沉默效果进行检验；所述的pCM130/tac载体是利用质粒pCM130加上启动子tac构成。