[发明专利]二球悬铃木PaMYB82基因在调控植物表皮毛中的应用

说明书

本发明属于植物基因工程技术领域。具体涉及二球悬铃木PaMYB82基因在调控植物表皮毛中的应用。所述的PaMYB82基因片段的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，该基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。生物学功能验证表明PaMYB82基因片段能够调控植物的表皮毛发育，将该基因超量表达转化植物，能够使转基因植物的表皮毛减少。

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域。具体涉及二球悬铃木基因片段的分离克隆、功能验证及应用。所述的基因与植物表皮毛发育调控有关。将PaMYB82基因的完整翻译区(CDS区)连到带有花椰菜花叶病毒启动子的超量表达载体，转化模式植物拟南芥，转基因拟南芥表现出表皮缺失或毛减少的性状。

背景技术

植物表皮毛是由表皮细胞向外延伸发育而来的，根据不同的标准可以分为单细胞或者多细胞表皮毛；腺毛或者非腺毛；分支或者不分支表皮毛。作为表皮毛附着在植物的表面对植物有机械保护的作用，一些腺毛可以分泌化学物质，有利于植物对生物、非生物胁迫的防御以及信号传递。对于植物的表皮毛有些不会脱落，但是有些表皮毛会在植物的不同发育时期脱落。

二球悬铃木(Platanus acerifolia Willd)是一球悬铃木和三球悬铃木杂交而得到的，具有优于一球和三球的杂种优势。悬铃木因其树干高大、树形优美，冠大荫浓，抗逆性强等特征被广泛的应用于城市绿化，并享有“行道树之王”的美誉。但是悬铃木的一些缺点使其应用受到了一定的限制，例如其飞毛问题。悬铃木的飞毛问题主要表现在果毛的飘落和叶毛的飘落。对于果毛飘落问题可以通过控制其开花结果来解决，但是叶毛飘落的问题则需要从表皮毛发育方面来控制。本发明通过基因工程方法来调控悬铃木表皮毛发育相关基因PaMYB82的表达，从而培育出不飞毛悬铃木，从根本上解决二球悬铃木的飞毛问题。

发明内容

本发明的目的在于客服现有技术存在的缺陷，分离二球悬铃木基因PaMYB82，并将其应用于植物表皮毛调控应用上，生物学功能验证表明所述的PaMYB82基因与植物表皮毛发育性状调控相关。

本发明提供了在二球悬铃木中表达的PaMYB82的基因的核苷酸序列和该基因编码的蛋白质序列及其功能验证，具体包括：PaMYB82基因的核苷酸编码序列的克隆，表达载体的构建，以及利用该基因转化拟南芥，进行分子鉴定和表型观察。

本发明的提技术方案如下所述：

首先从二球悬铃木(Platanus acerifolia Willd)中克隆得到PaMYB82基因片段。该基因片段的开放阅读框为672bp，其核苷酸序列如序列表SEQ ID N0：1所示。

本发明还提供了二球悬铃木PaMYB82基因编码的蛋白质序列，其蛋白质序列序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了用于克隆获得二球悬铃木样品中PaMYB82基因的引物对。该引物对根据PaMYB82基因的核苷酸序列设计，以悬铃木不同部位混合样品作为模板进行PCR扩增，获得753bp的片段。扩增上述基因的引物对的DNA序列如下所示：

P1正向引物(F):5'CCTTATTACGGCCTTTTTCTGTCAT 3'，

P2反向引物(R):5'GAGACACAAAATGCTGAATCTCAGG 3'；

本发明还提供了如下所示的用于检测二球悬铃木PaMYB82基因在转基因拟南芥中表达的引物序列。引物根据PaMYB82基因核酸序列设计，以转基因拟南芥样品cDNA为模板进行RT-PCR扩增，来检测外源基因PaMYB82是否在拟南芥中表达，片段长度为123bp。引物对的DNA序列如下所示：

P3正向引物(F):5'CAAAAGAGACGACTCCAGGTCAAAG 3'，

P4反向引物(R):5'ATTGGCTCATCATTGCCTTCATCTG 3'；