[发明专利]一种雪菊糖聚合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种糖聚合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)选材：选取干燥的雪菊的头状花序，用水浸泡6～12h，雪菊的头状花序为雪菊的茎、枝顶端的头状花序；

2)水提：用5～15倍体积的60～100℃的热水对步骤1)浸泡好的雪菊的头状花序提取1～4h，分别收集得到提取液和残渣；

3)分级醇沉：将步骤2)得到的提取液40～70℃减压浓缩，加入乙醇进行醇沉使乙醇的体积浓度为A％，静置10～28h分成上清液一和沉淀一，收集沉淀即得粗糖聚合物CT1；将上清液一再次40～70℃减压浓缩，加入乙醇进行醇沉使乙醇的体积浓度为B％，静置10～28h分成上清液二和沉淀二，收集沉淀二即得粗糖聚合物CT2；将上清液二再次40～70℃减压浓缩，加入乙醇进行醇沉使乙醇的体积浓度为C％，静置10～28h得到沉淀三，收集沉淀三即得粗糖聚合物CT3，其中10≤A＜60，60≤B＜80，80≤C＜100；

4)碱提：将步骤2)得到的残渣浸泡于0.1～1M浓度的NaOH溶液中，NaOH溶液的体积为残渣体积的5～20倍，静置1～4h得到上清液三，将上清液三用0.1～1M浓度的HCl溶液中和至pH值为6～8，离心分离后得到上清液四，将上清液四40～70℃减压浓缩，加入乙醇进行醇沉使乙醇的体积浓度为30～90％，静置10～28h得到沉淀四，收集沉淀四即得粗糖聚合物CTB；

5)纯化：利用Sevag法分别对粗糖聚合物CT1、CT2、CT3、CTB进行除蛋白，除蛋白后再经透析袋进行透析、冻干，透析袋的截留分子量为100Da，即得纯化粗糖聚合物CT1、CT2、CT3、CTB；

6)离子交换柱层析：取180mg步骤5)得到的纯化粗糖聚合物CTB，溶于9mL的去离子水中，上样于DEAE-Cellulose 52柱，在不同盐浓度的洗脱液条件下出现2个峰，其中峰一为0.05M浓度NaCl洗脱部分，峰二为0.1M浓度的NaCl洗脱部分，洗脱过程中使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线分别收集糖部分，将峰一所得洗脱液40～70℃减压浓缩、冷冻干燥得到峰一糖聚合物；

7)分子筛凝胶层析：将步骤6)得到的峰一糖聚合物用水进行溶解，离心分离后得到上清液，上Sephadex G75柱，用水进行洗脱，采用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，出现一个单一对称峰，收集主峰，40～70℃减压浓缩，冷冻干燥后得雪菊糖聚合物CTB-1；

8)离子交换柱层析：取180mg步骤5)得到的纯化粗糖聚合物CT1，溶于9mL的去离子水中，上样于DEAE-Cellulose 52柱，用0.05M浓度NaCl进行梯度洗脱，洗脱过程中使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分，将洗脱液40～70℃减压浓缩、冷冻干燥，用水进行溶解，离心分离后得到上清液；

9)分子筛凝胶层析：将步骤8)得到的上清液上Sephadex S-100柱，用水进行洗脱，采用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分，40～70℃减压浓缩，冷冻干燥后得雪菊糖聚合物CT1-2；

10)离子交换柱层析：取180mg步骤5)得到的纯化粗糖聚合物CT2，溶于9mL的去离子水中，上样于DEAE-Cellulose 52柱，分别用蒸馏水和0.05M浓度NaCl进行梯度洗脱，洗脱过程中使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分，将洗脱液40～70℃减压浓缩、冷冻干燥，用水进行溶解，离心分离后得到上清液；

11)分子筛凝胶层析：将步骤10)得到的上清液上Sephadex S系列柱，用水进行洗脱，采用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分，40～70℃减压浓缩，冷冻干燥后得雪菊糖聚合物CT2-1、CT2-1A、CT2-1B、CT2-2。