[发明专利]基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法在审
申请号: | 201910013725.7 | 申请日: | 2019-01-02 |
公开(公告)号: | CN111398573A | 公开(公告)日: | 2020-07-10 |
发明(设计)人: | 童艳丽;黄冠;梅清华 | 申请(专利权)人: | 广东省第二人民医院 |
主分类号: | G01N33/50 | 分类号: | G01N33/50;A01K67/033 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 510317 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基于 秀丽 线虫 肺癌 耐药 作用 药物 筛选 方法 | ||
1.一种基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)线虫的冻存
同步化后收集L1期线虫,离心,弃上清,浓缩,加入冻存管中,,置于-80℃冰箱保存;
(2)线虫的传代与培养
取出冻存管,20℃迅速解冻,倒在NGM平板上,置于20℃生化培养箱中培养;
(3)线虫的同步化
将培养基表面的孕虫和虫卵用缓冲液洗下,收集于离心管中,离心吸弃上清,解液,弃上清,20℃下培养24小时得到L1期线虫;
(4)液体板的制备
弃去LB液体培养基的上清,将大肠杆菌OP50置于无菌48孔板;
(5)线虫的EGFR-TKIs耐药模型的建立
将给药后48孔板中的线虫液体转移到EP管中,离心吸弃上清,加2mM叠氮钠溶液麻醉,置于浮游生物计数板上,在倒置显微镜下观察并计算突变体线虫的数目和线虫总数;
(6)对线虫模型给药,观察对比给药前和给药后线虫假阴门突变型
药物作用3天后进行观察,根据转基因秀丽隐杆线虫假阴门突变型变化的结果。
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