[发明专利]一种用于卵巢癌组织3D培养的培养基

说明书

本发明公开了一种用于卵巢癌组织3D培养的培养基，所述培养基含有以下成份：细胞因子B27、N‑乙酰半胱氨酸、R‑spondin 1、A83‑01、表皮生长因子、谷氨酰胺、N2Supplement、雌激素、孕酮、维生素E。本发明的培养基包括了多种针对于及卵巢癌组织细胞培养所需要的细胞因子，信号通路调控因子，各种细胞因子及调控因子相互直接密切影响，协调配合，使得卵巢癌组织细胞在培养过程中能够更好的表现出其固有的活性特征，实现高度近似于活体卵巢癌组织的综合特性，用此培养基3D培养的卵巢肿瘤细胞，成团聚集，中间缺氧，类似于卵巢肿瘤组织。

技术领域

本发明属于生物医药领域，公开了一种用于卵巢癌组织3D培养的培养基。

背景技术

目前抗肿瘤药物筛选评价的体外方法主要是肿瘤细胞的2D培养系统，体内筛选评价方法主要使用的是动物模型。2D培养时，肿瘤细胞在形态、分化、扩增、对刺激的代谢反应以及基因蛋白质表达等方面均与其在体内的状态存在着很大的不同，对于动物评价体系，接种成功率低，实验周期长，还由于与人类存在着较大的种属差异，也不能完全反映药物在人体内的代谢过程、药效作用和毒副作用。

人源组织类器官培养技术作为近来肿瘤学研究的新手段，体外3D培养条件下使用成熟人体细胞培养人体组织类器官，这种器官几乎保留了来源人体组织相同的遗传学特征，可在体外表现出与体内细胞相似的遗传物质以及结构的稳定性。目前，科学家已成功在体外使用使用成熟肝脏、小肠、消化道组织细胞培养出肝脏类器官及肺组织器官等，并利用这一技术在相关领域开展进行了多种研究。相对于传统细胞培养，这一技术可以为我们提供充足的遗传稳定、均一的体外培养的组织细胞，并将可能对直接研究基因在人体细胞中的作用提供巨大的帮助。

发明内容

为了解决上述存在的问题，本发明的目的在于提供一种用于卵巢癌组织3D培养的培养基。

本发明所采取的技术方案是：

一种用于卵巢癌组织3D培养的培养基，所述培养基含有以下成份：细胞因子B2750倍稀释、N-乙酰半胱氨酸0.8～1.2mM、R-spondin 1 200～250ng/ml、A83-01 150～250nM、表皮生长因子45～55ng/ml、谷氨酰胺100倍稀释、N2Supplement 100X稀释、雌激素0.5～1μM，孕酮1～10ng/ml，维生素E 1～5mM。

优选的，所述培训基还含有以下成份：Noggin 90～110ng/ml、FGF 10成纤维细胞生长因子40～60ng/ml、烟酰胺5～20mM、Y-27632 5～15μM、Gastrin 0.5～1.5nM、bFGF 0～5ng/ml。

优选的，所述谷氨酰胺为含有L-谷氨酰胺、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺稳定形式的二肽。

优选的，所述表皮生长因子为EGF。

优选的，所述成纤维细胞生长因子为FGF 10。

本发明的卵巢癌组织类器官的培养基针对于卵巢癌组织来源细胞的培养生长特点，选用了多种细胞因子成份按照一定的比例进行调和，经过调和的培养基中细胞因子，信号通路调控因子含量适宜，卵巢癌细胞能够有效的在3D环境中形成类器官。本发明的培养基，可以有效的维持组织细胞特异性、干细胞特性、基因分型高度一致，组织形态也高度相似。除了满足科学研究的需要，在临床用药指导方面，目前卵巢癌患者没有合适的靶向药物，活检样本的体外3D培养为患者的药物用药指导提供了很好的一个有益的选择。此外，本发明的培养基可以完成卵巢癌组织的传代培养，达到大规模复制卵巢癌组织类器官的需求，控制培养得到的类器官具有高度的一致性。卵巢癌肿瘤类器官3D培养模式图见图1。

本发明的有益效果是：