[发明专利]一种二氢硫辛酸琥珀酰转移酶抑制剂的筛选方法

权利要求书

1.一种二氢硫辛酸琥珀酰转移酶抑制剂的筛选方法，其特征在于包括：

用抑制剂预处理离体或活体介质得到预处理反应体系；所述离体或活体介质选自细胞裂解物、二氢硫辛酸琥珀酰转移酶或病菌；

然后使用探针处理所述预处理反应体系；

所述抑制剂为

所述探针为下述式I化合物所示：

其中R¹选自任意取代的亚烷基、亚氨基、任意取代的亚烯基、任意取代的亚炔基、任意取代的亚环烷基、任意取代的亚芳基或任意取代的亚杂芳基；

R²选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基；

经探针处理后的体系在Biotin-N₃存在下进行点击化学反应；

然后进行成像反应分析。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述细胞裂解物、二氢硫辛酸琥珀酰转移酶或病菌选自水稻白叶枯病菌细胞裂解物、柑橘溃疡病菌细胞裂解物、重组水稻白叶枯病菌二氢硫辛酸琥珀酰转移酶、水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌。

3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：R¹选自任意取代的C_1-6亚烷基、任意取代的C_1-6亚芳基。

4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：R¹选自亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚仲丁基、亚戊基、亚邻苯基、亚间苯基、亚对苯基、亚邻噻吩基、亚间噻吩基、亚邻呋喃基、亚间呋喃基、亚邻吡啶基、亚间吡啶基、亚对吡啶基、亚萘基、亚蒽基、亚卤代苯基。

5.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：R¹选自

6.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：R²选自C_1-6烷基或C_1-6芳基。

7.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：R²选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、戊基或苯基。

8.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述探针化合物选自下述化合物：

探针1：2-(甲磺酰基)-5-(4-氟-3-(丙炔基氧基)甲基)苯基-1,3,4-噁二唑；

探针2：2-(乙磺酰基)-5-(4-氟-3-(丙炔基氧基)甲基)苯基-1,3,4-噁二唑；

探针3：2-(甲磺酰基)-5-(3-(丙炔基氧基)甲基)苯基-1,3,4-噁二唑；

探针4：2-(乙磺酰基)-5-(3-(丙炔基氧基)甲基)苯基-1,3,4-噁二唑；

探针5：2-(甲磺酰基)-5-(2,4-二氯-3-(丙炔基氧基)甲基)苯基-1,3,4-噁二唑；

探针6：2-(乙磺酰基)-5-(2,4-二氯-3-(丙炔基氧基)甲基)苯基-1,3,4-噁二唑。

9.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于具体包含以下步骤：

(1)通过超声破碎法提取植物病原细菌总蛋白；

(2)将待筛选的二氢硫辛酸琥珀酰转移酶抑制剂与病原菌总蛋白在25℃下孵育2h，空白组用DMSO处理，然后用能标记二氢硫辛酸琥珀酰转移酶的探针分别处理总蛋白2h；

(3)分别向上述体系中加入Biotin-N₃、抗坏血酸钠以及BTTAA/CuSO₄混合溶液，在37℃下进行点击化学反应；

(4)将样品分别进行SDS-PAGE后在冰浴条件下转膜50min，经5％脱脂奶粉封闭2h后在4℃下孵育HRP-conjugatedStreptavidin，加入化学发光底物后进行成像分析。