[发明专利]用于恒温扩增检测麻疹病毒的核酸序列、试剂盒及方法和应用

权利要求书

1.一种用于恒温扩增检测麻疹病毒的核酸序列，其特征在于，所述核酸序列包含SEQID No.1和SEQ ID No.2所示的链置换引物序列、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的探针和SEQ ID No.5所示的交叉扩增引物序列。

2.根据权利要求1所述的核酸序列，其特征在于，SEQ ID No.3所示探针序列的5’端连接有荧光素，SEQ ID No.4所示探针序列的5’端连接有生物素。

3.一种用于恒温扩增检测麻疹病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含恒温扩增试剂，所述恒温扩增试剂中含有SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的链置换引物序列、SEQID No.3和SEQ ID No.4所示的探针和SEQ ID No.5所示的交叉扩增引物序列。

优选的，SEQ ID No.3所示探针序列的5’端连接有荧光素，SEQ ID No.4所示探针序列的5’端连接有生物素。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示链置换引物的浓度均为0.1μM、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的探针的浓度为0.3～0.5μM、SEQID No.5所示的交叉扩增引物的浓度为0.6μM。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述恒温扩增试剂中还含有1×BstBuffer、甜菜碱、MgSO₄、dNTPs、RNase保护剂、Bst DNA聚合酶、AMV逆转录酶；

优选的，所述恒温扩增试剂中含有20mM Tris-HCl(pH＝8.8)、10mM KCl、10mM(NH₄)₂SO₄、1M MgSO₄、10×Thermo pol buffer、5M甜菜碱、8U/μl Bst DNA聚合酶、10U AMV逆转录酶、10mM dNTPs、25×RNA secure。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有RNA提取试剂。

7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有阳性对照和阴性对照，所述阳性对照为麻疹病毒N基因片段的体外转录产物；所述阴性对照为灭菌去离子水。

8.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测试纸条；

优选的，所述检测试纸条选自垂直流动核酸试纸条防污染检测装置，所述垂直流动核酸试纸条防污染检测装置包括一衬垫，所述衬垫由下向上依次设置有样品垫、有色颗粒结合物垫、纤维膜和吸水滤纸垫，上述各部分在相邻处部分重叠；所述纤维膜上依次设置有检测线和质控线，所述检测线上包被有抗荧光素抗体，所述质控线上包被有生物素，所述有色颗粒结合物垫上的有色颗粒包被有亲和素。

9.一种恒温扩增检测麻疹病毒的方法，其特征在于，至少包括以下步骤：

(1)提取待检标本中提取病毒RNA；

(2)将步骤(1)提取得到的病毒RNA作为模板加入到装有恒温扩增试剂的PCR管中；所述恒温扩增试剂中含有SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的链置换引物序列、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的探针和SEQ ID No.5所示的交叉扩增引物序列；

优选的，58～62℃扩增反应80～100min，78～82℃酶灭活2～3min；

更优选的，恒温扩增条件为：60℃扩增反应90min，80℃酶灭活2min。

(3)采用检测试纸条进行检测，优选采用垂直流动核酸试纸条防污染检测装置进行检测。

10.如权利要求1所述的核酸序列在麻疹病毒检测中的应用。