[发明专利]一种基于核酸外切酶Ⅲ的正反馈放大电化学传感器

权利要求书

1.一种基于核酸外切酶Ⅲ的正反馈放大电化学传感器，其特征在于：包括金电极和固定在金电极上的Hybrid DNA，所述Hybrid DNA从5'端到3'端依次包括硫氢键、双链DNA结构和单链DNA结构，所述双链DNA结构由C-DNA与G4-DNA和A-DNA杂交制备而成，所述单链DNA结构的碱基序列为与T-DNA的碱基序列互补；Hybrid DNA通过S-Au键固定在金电极上；

所述C-DNA的碱基序列为

5'-ATCCCGCCCAACCCAGTCCAAGTGTCGTTCGTCAAAATCTCTAGCAGT-3'；

所述G4-DNA的碱基序列为：5'-GACTGGGTTGGGCGGGAT GGGTTTTTT-(CH2)6-SH-3'；

所述A-DNA的碱基序列为：5'-GACGAACGACACTTG CAGCAT-3'。

2.如权利要求1所述电化学传感器的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)金电极的预处理；

2)Hybrid DNA的制备，将G4-DNA，C-DNA和A-DNA在Tris-HCl缓冲液中混合并加热设定时间，冷却后放置设定时间，得到Hybrid DNA溶液；

3)将步骤2)中制得Hybrid DNA溶液滴加到预处理后的金电极上，设定温度下静置设定时间后，干燥，制得电化学传感器；

步骤1)中，所述金电极的预处理方法为，在放有氧化铝浆料的绒布上抛光金电极，然后依次用超纯水和乙醇洗涤，以除去残留的氧化铝粉末；再将氧化铝抛光后的金电极放入稀硫酸溶液中，在-0.2V到1.6V以100mV·s^-1的扫描速率循环扫描，对金电极进行电化学预处理，直到获得稳定的循环伏安图，用超纯水清洗后即可；

步骤2)中，所述G4-DNA，C-DNA和A-DNA的摩尔比为1:8-12:8-12；所述Tris-HCl缓冲液的pH值为8；加热的温度为85-95℃，加热的时间为15-25min；冷却至室温后，在25-35℃放置2小时以上；

步骤3)中，将Hybrid DNA在滴加到金电极之前，需与10mM三(2-羧乙基)膦盐酸盐在黑暗中温育1小时；

步骤3)中，滴加有Hybrid DNA溶液的金电极在4℃放置12小时以上；

步骤3)中，还包括将干燥后的金电极浸入1mM MCH溶液中1小时，以减少非特异性吸附，制成的电化学传感器放置在4℃以备进一步使用。