[发明专利]一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法

说明书

一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法，属于抗体检测领域，能够实现对水貂血清中绿脓杆菌抗体水平的快速检测。本发明的检测试剂盒包括：包被抗原、包被缓冲液、2％BSA封闭液、PBST洗涤缓冲液、一抗阳性血清、阴性对照血清、样品稀释液、酶标二抗、底物显色液和终止液；包被抗原为用包被缓冲液稀释成浓度为10⁷～10⁹cfu/mL的病原菌液；一抗阳性血清是以绿脓杆菌为抗原，免疫水貂获得的血清；阴性对照血清为未进行免疫的水貂血清。本发明具有特异性好、灵敏度高、重复性好、快速、简便、准确等特点，同时还具有结果稳定、使用范围广的优点，可用于水貂血清中绿脓杆菌抗体的大规模检测，有利于了解整个水貂群绿脓杆菌病抗体的状况。

技术领域

本发明属于抗体检测技术领域，具体涉及一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法。

背景技术

绿脓杆菌(P.aeruginosa)或称铜绿色假单胞菌，是一种致病力较低但抗药性强的杆菌，广泛存在于自然界，是伤口感染较常见的一种细菌，能引起化脓性病变，感染后因脓汁和渗出液等病料呈绿色，故名。绿脓杆菌(P.aeruginosa)属假单胞菌属(pseudomonas)，广泛分布于自然界及正常人皮肤、肠道和呼吸道，是临床上较常见的条件致病菌之一。水貂出血性肺炎是由绿脓杆菌引起的急性传染病，多发生于秋季温暖潮湿的季节，以出血性肺炎为主要特征，发病急，死亡快，常呈地方性暴发性流行，给养貂业造成了巨大的经济损失。水貂出血性肺炎从1950年开始在世界多个国家流行，近些年来由于我国水貂养殖规模和集约化程度明显提高，该病危害程度逐年加深。目前该病已成为危害水貂养殖的主要传染病之一。因此，建立简便，稳定的血清中绿脓杆菌抗体检测技术，尤其是早期快速检测技术就显得尤为重要和迫切。

目前，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测绿脓杆菌抗体的研究尚未见报道。

发明内容

为克服现有技术存在的不足，本发明提供一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒及检测方法，能够实现对水貂血清中绿脓杆菌抗体水平的快速检测。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测试剂盒，包括：包被抗原、包被缓冲液、2％BSA封闭液、PBST洗涤缓冲液、一抗阳性血清、阴性对照血清、样品稀释液、酶标二抗、底物显色液和终止液；

所述包被抗原为用包被缓冲液稀释成浓度为10⁷～10⁹cfu/mL的病原菌液；

所述一抗阳性血清是以绿脓杆菌为抗原，免疫水貂获得的血清；

所述阴性对照血清为未进行免疫的水貂血清。

作为优选的实施方式，所述包被缓冲液为0.05M的碳酸盐缓冲液，pH为9.6。

作为优选的实施方式，所述2％BSA封闭液为质量浓度1～5％的牛血清蛋白溶液。

作为优选的实施方式，所述PBST洗涤缓冲液为0.15M的PBS溶液。

作为优选的实施方式，所述样品稀释液为0.05M的碳酸盐缓冲液，pH为9.6。

作为优选的实施方式，所述酶标二抗为兔抗貂IgG-HRP酶标抗体。

作为优选的实施方式，所述底物显色液为可溶型单组分TMB四甲基联苯胺底物溶液。

作为优选的实施方式，所述终止液为2M的H₂SO₄。

本发明还提供了一种绿脓杆菌抗体ELISA快速检测方法，包括以下步骤：

步骤一、抗原包被