[发明专利]靶向卵巢癌细胞特异性高表达蛋白FSHR的CAR载体及其构建方法和应用

说明书

本发明属于医药生物领域，具体涉及靶向卵巢癌细胞特异性高表达蛋白FSHR的CAR载体及其构建方法和应用。所述的CAR载体包括FSHR单链抗体，CAR的结构为CD8leader‑FSHR scfv‑CD8α‑CD28‑CD137‑CD3ζ。以病毒感染方式获得含有该治疗载体CAR‑T细胞(Chimeric Antigen Receptor T‑Cell)，通过表达CAR结构，可识别并靶向杀伤高表达肿瘤相关抗原FSHR的卵巢癌细胞。

技术领域

本发明属于医药生物领域，具体涉及靶向卵巢癌细胞特异性高表达蛋白FSHR的CAR载体及其构建方法和应用。

背景技术

卵巢癌是女性生殖器官最常见的三大恶性肿瘤之一，其死亡率占女性恶性肿瘤的第一位，是女性癌症病人死亡的首要死因。由于卵巢癌患者早期常无明显临床表现，且目前尚缺乏可供早期诊断的特异性检验指标，70％的患者确诊时已属于卵巢恶性肿瘤晚期，严重影响其5年生存率。目前卵巢癌的治疗方法有手术治疗、化疗、中医治疗、免疫治疗等。近年来，随着基础科学研究的不断发展，免疫治疗越来越受到人们的重视。

LAK细胞、DC、CIK细胞都曾作为肿瘤的免疫治疗手段，但是以上各种治疗方法均缺乏特异性识别肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，TAA)和杀伤特定肿瘤靶细胞的能力；而肿瘤免疫编辑的过程又会使靶细胞表面的主要组织相容性复合物(mainhistocompatibility complex，MHC)在肿瘤细胞表面表达下降，形成免疫逃逸，使肿瘤细胞可成功躲避T细胞攻击。

嵌合抗原受体(CAR)-T细胞疗法是通过基因工程技术在T细胞表面人为过表达能识别特定的肿瘤表面抗原的单链抗体可变区基因片段，从而使T细胞识别特定抗原、杀伤表达该抗原的靶细胞。同时，由于CAR-T细胞是采用抗体识别抗原模式，因此不受MHC的限制。

卵泡激素受体(FSHR)是卵泡激素(FSH)的受体，正常组织中仅有卵巢上表达FSHR，其它组织结构中几乎不表达。目前发现卵巢癌在FSH水平较高的人群中发病率较高，检测中也显示FSHR在卵巢癌的组织中高表达。所以FSHR可以作为一个特异性的卵巢癌相关靶点进行免疫治疗研究。

因此，如何避免肿瘤免疫逃逸的发生，增强T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤，从而提高CAR-T免疫疗法抗卵巢癌的效果，成为CAR-T治疗的一个技术难题。

目前，国内尚未见有关能靶向FSHR的CAR-T细胞卵巢癌治疗方案。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，本发明提供了能靶向FSHR的CAR载体，本发明提供的能靶向FSHR的CAR载体既可以识别FSHR阳性表达的卵巢癌细胞，又可以增强T淋巴细胞杀伤能力，从而提高CAR-T免疫疗法抗卵巢癌的效果。此外，本发明还提供了靶向卵巢癌细胞特异性高表达蛋白FSHR的CAR载体的构建方法及其应用。

本发明提供的靶向卵巢癌细胞特异性高表达蛋白FSHR的CAR载体具体技术方案如下：

靶向卵巢癌细胞特异性高表达蛋白FSHR的CAR载体，包括嵌合抗原受体和载体，所述嵌合抗原受体连接在所述载体上，

所述嵌合抗原受体包括FSHR单链抗体的特异性结构，所述FSHR单链抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在某些实施方式中，所述嵌合抗原受体的结构组成为CD8leader-FSHRscfv-CD8α-CD28-CD137-CD3ζ。