[发明专利]一种中华鳖生长性状的MSTN基因分子标记选择方法

说明书

本发明公开了一种中华鳖生长性状的MSTN基因分子标记选择方法，即在中华鳖MSTN基因中的第一内含子序列上的一个SNP位点，以起始密码子为起点，为T2194C。在中华鳖群体中筛选出与生长性状紧密关联的MSTN基因的育种标记，并在中华鳖的育种群体中筛选和构建带有该育种标记的中华鳖选育群体。该方法可以提高中华鳖生长性状选择的准确性，为开展中华鳖的分子标记辅助育种奠定基础和提供参考。

技术领域

本发明涉及中华鳖MSTN基因序列SNP位点的检测方法和应用范围，属于分子生物学领域。

背景技术

生长性状是中华鳖重要的经济性状之一，受到肌肉生长发育等诸多遗传和环境因素的影响。通过表型对生长性状进行选择往往遗传进展缓慢，寻找控制中华鳖生长性状的主效基因及其遗传标记，使用分子标记辅助选择可以加快选育进程，对提高中华鳖生长性能具有重要意义。

肌肉生长抑制素基因（Myostation，MSTN），是生长转化因子β（transforminggrowth factor-beta，TGF-β）超家族的一员，对动物肌肉生长发育起着负向调控的作用。据报道MSTN基因的多态性与水产动物的生长性状存在显著的关联。如张猛等（2016）采用直接测序法对草鱼MSTN基因多态性进行分析，检测到第2内含子的碱基突变与体长和体质量等生长性状存在关联性。Meng等（2017）对3个海湾扇贝群体MSTN基因的多态性进行筛选，找到2个与体质量、肌肉质量等生长性状相关的SNP位点。Zhou等（2017）鉴定出墨吉明对虾MSTN基因多个SNP位点与体长、体质量等生长性状显著相关。陈义培等（2018）分析了中华绒螯蟹3个群体MSTN基因第1外显子的遗传变异，发现1个多态位点对体重和壳长等生长性状有显著影响。但有关中华鳖MSTN基因碱基突变与生长性状的关联研究未见报道。

中华鳖，是我国极为重要的水产经济动物，2017年全国中华鳖产量超30万吨。但目前我国的中华鳖质量参差不齐，种质混杂、退化，中华鳖良种数量少且覆盖率较低，严重制约产业发展。面对中华鳖良种强烈的需求，传统育种手段已远远无法满足，开展中华鳖分子标记辅助育种工作，提高选择效率，加快育种进程是必要的。

发明内容

本发明的目的是找到在中华鳖生长中具有重要调控作用的MSTN基因（SEQ IDNO.1）上的SNP位点，将位点基因型与生长性状进行关联分析，为中华鳖生长性状的标记辅助选择提供一种有效的分子标记。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种中华鳖生长性状的MSTN基因分子标记选择方法，包括如下的步骤：

（1）利用扩增引物从中华鳖基因组DNA中进行扩增；

（2）将从不同中华鳖获得的扩增片段进行测序，筛选出碱基突变位点；

（3）对中华鳖群体中的个体进行基因型检测，利用广义线性模型GLM对中华鳖的生长性状值与基因型间的关系进行最小二乘法估计；

（4）采用最小二乘法和多重比较分析中华鳖群体不同基因型间生长性状的差异，最终确定与中华鳖生长性状值存在显著相关的SNP位点。

优选地，步骤（1）所述扩增引物的核苷酸序列分别为P1：SEQ ID NO.2和P2：SEQ IDNO.3，具体引物信息如下：

P1：TCTGTTTATATGATATGCTGGC （SEQ ID NO.2）