[发明专利]从小龙虾肠道分离的枯草芽胞杆菌CP-3

说明书

本发明属于农业微生物应用技术领域，具体涉及从小龙虾肠道分离的枯草芽胞杆菌CP‑3。研究了枯草芽胞杆菌CP‑3的产酶特性及应用。通过平板筛选法，从小龙虾肠道中分离筛选得到Bacillus subtilis(枯草芽胞杆菌)CP‑3，保藏号为CCTCC NO：M 2018867。该菌株具有纤维素酶，木聚糖酶，蛋白酶和淀粉酶等酶活特性。该菌株最适发酵时间3d，最适培养温度37℃，初始pH＝5，装料量为30g/250ml三角瓶，接种量为2.5％；碳源为麸皮与玉米芯混合物，其中麸皮占比为60％；当氮源为氯化铵时，木聚糖酶活力达到3459.58U/g(以湿基计)。可用于生物饲料或微生态菌剂的开发。

技术领域

本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及从小龙虾(克氏原螯虾，Procambarusclarkii)肠道分离的一株枯草芽胞杆菌CP-3。该枯草芽胞杆菌具有产纤维素酶、木聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶的特性，可应用于生物饲料发酵和微生态制剂制备菌剂的应用。

背景技术

近年来，小龙虾即克氏原螯虾的养殖产业飞速发展，由最初的小规模养殖和简单的加工出口而不断发展完善，现在中国的小龙虾产业成为集育苗、养殖、加工、餐饮、销售、休闲旅游和文化等一体的综合性产业。虽然小龙虾产业发展迅猛，但是其相关的科学研究却显得相对滞后。目前，国内外对克氏原螯虾的研究主要集中于其行为学、种群结构与分布及疾病与免疫方面，对营养饲料方面的研究也主要集中在蛋白质、脂肪等方面，而对于小龙虾肠道细菌的相关研究却鲜有报道。肠道微生物在水产动物营养吸收、生长代谢和免疫抗病等方面发挥着重要作用，对小龙虾肠道菌群的研究可为小龙虾养殖用益生菌的开发和饲料配方的优化提供依据。

小龙虾肠道微生物是小龙虾降解蛋白质、纤维素和半纤维素的主要驱动力，因此，从小龙虾肠道内筛选到降解木质纤维素以及蛋白质的优良菌株，为创制新型小龙虾饲料提供饲料菌剂。

发明内容

本申请人已经表明，肠道是小龙虾(克氏原螯虾，Procambarus clarkii)消化蛋白质以及木质纤维素的重要部位，而定殖细菌主要集中在此部位，可以从小龙虾肠道内筛选优良益生菌株，为小龙虾提供生物饲料菌剂。

本发明分离的菌株枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)菌株，是申请人2017年11月5日从湖北潜江市的克氏原螯虾(俗称：小龙虾)肠道菌群中分离并鉴定的一株分离菌株，申请人将该菌株命名为Bacillus subtilis CP-3(枯草芽胞杆菌CP-3)，该菌株具有以下一种或多种特征：

(i)具有纤维素酶活性；

(ii)具有木聚糖酶活性；

(iii)具有蛋白酶活性；

(iv)具有淀粉酶活性；

该菌株最适发酵时间为3d，最适培养温度为37℃，初始pH＝5，装料量为30g/250ml三角瓶，接种量为2.5％，培养基中碳源为麸皮与玉米芯混合物，其中麸皮占比为60％(质量比)，当氮源为氯化铵时，其木聚糖酶活力可达3459.58U/g(以湿基计)。

从菌落形态来看，CP-3菌落圆形，扁平，表面干燥，革兰氏染色阳性，产芽孢。

根据经典微生物学分类和16S rDNA序列辅助鉴定，申请人将该菌株鉴定为Bacillus subtilis CP-3，于2018年12月06日将该菌株送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO:M2018867。

附图说明

图1：枯草芽胞杆菌菌株CP-3木聚糖酶的活性检测。

图2：枯草芽胞杆菌菌株CP-3纤维素酶的活性检测。

图3：枯草芽胞杆菌菌株CP-3蛋白酶的活性检测。