[发明专利]环介导恒温扩增结合纳米生物传感检测肺炎支原体的方法

权利要求书

1.一种环介导恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)提取待检测样品的基因组；

(2)提供如SEQ ID NO：1所示的外引物F3，SEQ ID NO：2所示的外引物B3，SEQ ID NO：3所示的内引物FIP，SEQ ID NO：4所示的内引物BIP，SEQ ID NO：5所示的环引物LF，SEQ IDNO：6所示的环引物LB，其中，选择以上任一引物的5’端标记半抗原，选择任意另一种引物的5’端标记生物素；

(3)在链移位型聚合酶Bst 2.0、解链温度调节剂、引物、以及脱氧核糖核苷三磷酸存在下，使用待检测样品的基因组核酸作为模板恒温扩增DNA；

(4)使用高分子纳米生物传感器检测步骤(3)的扩增产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在5’端标记有半抗原的引物为FIP，在5’端标记有生物素的引物为LF。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在引物FIP的5’端标记的半抗原为FITC。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述高分子纳米生物传感器包括一背板，在所述背板上依次设置装有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水垫，在所述硝酸纤维素膜上依次设置检测线及控制线，在结合垫、检测线、及控制线区域依次包被有色基团修饰的亲和素化的高分子纳米粒子、羊抗FITC抗体及生物素偶联的牛血清蛋白。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述恒温扩增是在60-67℃的环境中进行的。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述恒温扩增是在65℃的环境中进行的。

7.一组用于恒温扩增肺炎支原体特异基因P1的引物序列，其特征在于，所述序列包括：如SEQ ID NO：1所示的引物F3，SEQ ID NO：2所示的引物B3，SEQ ID NO：3所示的引物FIP，SEQ ID NO：4所示的引物BIP，SEQ ID NO：5所示的引物LF，SEQ ID NO：6所示的引物LB，其中，选择以上任一引物的5’端标记半抗原，选择任意另一种引物的5’端标记生物素。

8.根据权利要求7所述的引物序列，其特征在于，在5’端标记有半抗原的修饰引物为FIP，在5’端标记有生物素的修饰引物为LF。

9.根据权利要求8所述的引物序列，其特征在于，在引物FIP的5’端标记的半抗原为FITC。