[发明专利]一种全细胞生物催化同时制备手性邻氨基醇和手性二醇的方法

权利要求书

1.一种全细胞生物催化同时制备手性邻氨基醇和手性二醇的方法，其特征在于：以重组大肠杆菌E. coli(TAm)、E. coli(CR)和E. coli(GDH)全细胞为生物催化剂，以外消旋邻氨基醇为底物，在磷酸盐缓冲液中反应，同时实现合成手性纯二醇和邻氨基醇。

2.根据权利要求1所述的一种全细胞生物催化同时制备手性邻氨基醇和手性二醇的方法，其特征在于：反应体系中重组大肠杆菌E. coli(TAm)为表达S型转氨酶即S-TAm的全细胞，反应后的产物为S-构型的邻氨基醇；反应体系中重组大肠杆菌E. coli(TAm)为表达R型转氨酶即R-Tam的全细胞，反应后的产物为R构型的邻氨基醇。

3.根据权利要求1或2所述的一种全细胞生物催化同时制备手性邻氨基醇和手性二醇的方法，其特征在于：反应体系中重组大肠杆菌E. coli(CR)为S型羰基还原酶即S-CR的全细胞，反应后的产物为S构型的二醇；反应体系中重组大肠杆菌E. coli(CR)为R型羰基还原酶即R-CR的全细胞，反应后的产物为R构型的二醇。

4.根据权利要求1所述的一种全细胞生物催化同时制备手性邻氨基醇和手性二醇的方法，其特征在于：具体步骤为：

（1）构建共表达羰基还原酶BDHA和葡萄糖脱氢酶GDH的工程菌株E. coli (BDHA–GDH)，共表达羰基还原酶GoSCR和葡萄糖脱氢酶GDH的工程菌株E. coli (GoSCR–GDH)，获得重组菌株E. coli (BDHA–GDH)和E. coli (GoSCR–GDH)的细胞；

（2）构建重组菌株E. coli (MVTA)、E. coli (CV2025)、E. coli (PpbauA)，高效表达(R)-转氨酶MVTA、(S)-转氨酶CV2025和(S)-转氨酶PpbauA，得到重组菌株E. coli (MVTA)，E. coli (CV2025)和E. coli (PpbauA)的细胞；

（3）将重组菌E. coli (BDHA–GDH)，E. coli (GoSCR–GDH)，E. coli (MVTA)和E. coli (CV2025)的细胞分四种组合按照比例1：1混合作为生物催化剂，生物催化剂的细胞用量为10-15 g cdw/L，加入终浓度为10-60 mM的底物，终浓度为10-60 mM的丙酮酸钠，终浓度为10-60 mM的葡萄糖，终浓度为0.01-1.0 mM的PLP，浓度为0.1 M、pH为7.0的磷酸钠缓冲液作为磷酸盐缓冲液，反应温度为25℃，反应1-24 h，通过全细胞催化合成手性邻氨基醇和手性二醇；

（4）反应液的分离：反应结束后，用浓盐酸调节反应液pH至pH<2，加氯化钠到饱和，用等体积乙酸乙酯进行萃取二醇，再将反应液用氢氧化钠溶液调节pH至pH>10，用等体积乙酸乙酯萃取出手性氨醇。