[发明专利]一种高效低成本从茶多酚中获得3种儿茶素单体的分离方法

说明书

本发明公开了一种高效低成本从茶多酚中获得3种儿茶素单体的分离方法。所述的过程包括以下步骤:（1）实验前预处理：激活大孔树脂；（2）茶多酚溶解于超纯（UP）水中；（3）用蛋白纯化仪，通过280nm波长信号自动分离茶多酚;（4）收集峰段分离后的溶液，运用高效液相色谱（HPLC）检测峰液成分。通过与其它的儿茶素单体提取方法比较，本发明具有操作简单快速，成本低，一次性提取儿茶素单体种类多，提取纯度高的特点。经过一定的优化后，可进行工业化生产。

技术领域

本发明属于天然植物有效成分的提取及深加工领域，具体涉及一种高效低成本从茶多酚中获得3种儿茶素单体的分离方法。

背景技术

茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇（儿茶素）类、黄酮醇类、花色苷类和酚酸类等。主要为黄烷醇（儿茶素）类，儿茶素占60-80%。儿茶素类主要成分为表没食子儿茶素没食子酸脂（EGCG），另外还存在其它具有生物活性的儿茶素单体。儿茶素不仅是一种天然无毒的抗氧化剂，也是一种天然的备选药物，具有消炎、杀菌、抗氧化和抗辐射等作用。目前高纯度的儿茶素单体分离方法主要有高效液相制备色谱法（HPLC），柱层析分离法，高速逆流色谱法，膜分离法，聚酰胺分离法等。HPLC优点为能有效地分离儿茶素多种组分且纯度较高，缺点为重现性不好，量少，且成本较高。柱层析分离法优点为可以得到较高纯度的EGCG，缺点为收集得率低，所需时间长，分离后严重拖尾。高速逆流色谱法优点为可以分离出多个儿茶素单体组分，但上样量过多的时候，组分会发生重叠，导致分离效果显著降低。目前高纯度的儿茶素单体分离方法仍主要停留在色谱分离技术，虽能获得纯度较高的儿茶素单体，但分离方法复杂，耗时长，成本高，难以用于工业化生产。本发明采用蛋白纯化仪来分离茶多酚，不仅开创了新的儿茶素单体分离技术，且分离方法简便，成本低，具有较好的工业应用价值。

值得一提的是，相比于其它儿茶素单体的分离方法，本发明中对于儿茶素分离过程，因为分离液在收集时候用检测波长280nm，儿茶素在280nm处有明显的吸收峰,虽然蛋白质在280nm处也有吸收峰，但因为蛋白质是大分子，很容易利用树脂和小分子儿茶素分离，故可根据A-T（吸光度-透光度）来判断儿茶素单体的分离状态，这对于儿茶素分离与纯化的研究，提供了一种参考途径。另外，本发明在一次实验中，相较于单纯用大孔树脂只能提取一种儿茶素单体，可一次性连续分离出3种较高纯度儿茶素单体，。因此，通过本发明，可提高提取多种儿茶素单体的高效，进一步拓展了茶叶深加工领域技术，使茶叶资源得到合理利用，促进茶产业的健康发展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效低成本从茶多酚中获得3种儿茶素单体的分离方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种高效低成本从茶多酚中获得3种儿茶素单体的分离方法，包括如下具体步骤：

（1）实验前预处理，将大孔树脂进行放在94%-96%的乙醇中浸泡24-26h，激活树脂。

（2）将茶多酚和UP水进行质量体积比1mg：1mL混合，轻微振荡得到茶多酚溶液。处理时间为2-3min，现配现用。

（3）连接好装置，用UP水，以9.2 r/min速率对蛋白纯化仪进行平衡1.5-3h，调平基线。将溶解后的茶多酚以6.9 r/min的速率进行上样，上样时间为20-25min。上样后按照UP水、10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇的梯度，9.2 r/min的速率分别进行洗脱。

（4）每个洗脱梯度，洗脱5-7 BV液体，每隔14-16min（0.5BV）收集1.3-1.5ml分离液。如出现峰值，则需另外收集峰值分离液。