[发明专利]一株双氯芬酸单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株双氯芬酸单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。本发明双氯芬酸单克隆抗体杂交瘤细胞株A号，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.17301。本发明将高效价，低IC₅₀小鼠的脾细胞，通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，采用选择培养基，筛选出二种细胞融合后的杂交细胞；再经过间接竞争酶联免疫法筛选细胞并三次亚克隆，最终得到一株单克隆抗体杂交瘤细胞株A号。此细胞株分泌的单克隆抗体，对双氯芬酸具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为2ng/mL），可实现对鸡肉、鸡的肝脏和饲料中双氯芬酸残留量的检测，为食品中双氯芬酸残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株双氯芬酸单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。

背景技术

双氯芬酸（Diclofenac，DCF）属于非甾体抗炎药。具有抗炎、镇痛及解热作用。用于风湿性关节炎、粘连性脊椎炎、非炎性关节痛、关节炎、非关节性风湿病、非关节性炎症引起的疼痛，各种神经痛、癌症疼痛、创伤后疼痛及各种炎症所致发热等。其镇痛、消炎及解热作用比吲哚美辛强2~2.5倍，比阿司匹林强26~50倍。主要作用机制是抑制前列腺素合成酶，使前列腺素生物合成受阻。特点为药效强，不良反应少，剂量小，个体差异小。

双氯芬酸已被广泛应用于农业、畜禽和饲料等领域。因此 双氯芬酸在自来水中一般都有一定的残留，而人体摄入双氯芬酸过多会对人类的肝肾等器官造成代谢负担，若在自来水中，有过多双氯芬酸残留，则有害于人类健康。国家标准 GB/T 29691-2013 将双氯芬酸(DCF)作为允许使用的饲料添加剂，同时也规定了其最高允许使用限量（0.02mg/kg）和最高允许残留量（0.1mg/kg）。但是这些标准都采用高效液相色谱方法检测，检测方法较为繁琐、复杂，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对DCF的高效、快速的检测方法，而酶联免疫法（ELISA）前处理简单，成本低，可实现大量样品的快速检测，且检测时对样本的纯度要求不高。因此，建立高效的免疫学检测方法很有必要，而建立此方法的一个重要前提即需筛选出针对双氯芬酸的高特异性单克隆抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一株双氯芬酸单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，由该细胞株制备的抗体对双氯芬酸具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立双氯芬酸的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株双氯芬酸单克隆抗体杂交瘤细胞株A号，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2018年5月24日，保藏编号CGMCC No.17301。

双氯芬酸单克隆抗体，它由所述保藏编号CGMCC No.17301的双氯芬酸单克隆抗体杂交瘤细胞株A号分泌产生。

所述双氯芬酸单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中双氯芬酸残留的分析检测。

本发明提供的双氯芬酸单克隆抗体杂交瘤细胞株A号的制备基本步骤为：

（1）半抗原的制备：

原药 Mol. Wt: 278.13

由于DCF化学结构式中含有活泼基团（羧基），因此本发明将原药直接作为半抗原。